重组人蛋白细胞因子的研究选择 - 细胞因子 -
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1．重组蛋白表达体系
MCE 重组蛋白表达体系主要有：大肠杆菌，酵母细胞，昆虫细胞和哺乳动物
细胞。
2．重组蛋白纯度和浓度测定
重组蛋白纯度测定方法：a. SDS-PAGE 测定法；b. HPLC 测定法；c. 银染测 定法。
重组蛋白浓度测定方法：a. Bradford 蛋白定量测定法；b. BCA 蛋白定量测 定法；c. SDS-PAGE 蛋白定量测定法。
3．重组蛋白表达体系对比
优缺点 繁殖快、成本低，产量高，但不能进行原核体系 糖基化修饰，常为包涵体 哺乳动物细胞 结构与天然蛋白最接近，完善的翻译后表达体系 加工，活性更好，但表达水平较低，周期长，技术要求高 易操作，蛋白背景弱，适合大规模生产，酵母细胞 便于纯化，但存在产量不高以及糖基化达不到要求等问题 功能与天然蛋白相似，对于部分有毒性或较难表达蛋白有优势，但糖基化程度昆虫细胞 低，形式比较单一，活性不如哺乳动物细胞表达系统
4．重组蛋白表达体系选择 研究目的 蛋白要求 纯度>80%，不需要蛋白用作抗原，获得特异性抗修饰或天然活性，可带标原核表达体系 体 签 2/3 是原核表达体系，1/3 用于检测蛋白质结晶及晶体结构研究 纯度>95%，浓度通常在 是昆虫细胞表达体系与10 mg/mL 哺乳动物细胞表达体系 需要保存蛋白的天然活蛋白的功能研究 性 达体系 原核表达体系和真核表最适表达系统 一般要求尽量保存天然用于药物研究的蛋白质 序列，具有天然活性
5．重组蛋白开盖使用前处理
为防止冻干粉产品的粉末沾在管壁或管盖上，使用前请勿开盖，离心(约 13000 rpm)处理 20-30 秒，使附于管盖或管壁的蛋白收集于管底。MCE 保 证每管产品的蛋白总量达到标示含量。
6．重组蛋白复溶
a. 使用前先离心(约 13000 rpm)处理 20-30 秒，使附于管盖或管壁的蛋白 收集于管底。
b. 严格依据说明书，使用推荐的溶液将蛋白冻干粉溶解至推荐的浓度。大 多数重组蛋白建议溶解在灭菌超纯水中，浓度不低于 100 μg/mL，以便于 后续进一步稀释至工作浓度。
c. 用移液枪轻吹混匀，或将管盖盖好后轻柔颠倒数次进行混匀，低速离心 数秒。
d. 复溶后的重组蛋白在室温放置数分钟，以保证蛋白能够充分溶解。
7.重组蛋白储存
真核表达体系
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