荔枝果皮多酚对荔枝霜疫霉生物学特性的影响

荔枝果皮多酚对荔枝霜疫霉生物学特性的影响

张 荣1?，徐丹丹2?，江立群2，李敏慧2，习平根2，姜子德2

【摘 要】摘要： 【目的】探讨荔枝多酚对荔枝霜疫霉生长发育的影响。【方法】溶剂浸提法提取荔枝果皮中的总多酚，采用常规植物病理学手段研究荔枝多酚质量浓度对荔枝霜疫霉菌落形态、生物量、孢子囊萌发方式、游动孢子萌发及卵孢子数量的影响。【结果】荔枝多酚质量浓度为150～300 μg·mL-1时，荔枝霜疫霉菌落致密，菌丝生长量和产孢量显著减少，孢子囊以释放游动孢子的方式萌发；培养基中荔枝多酚为100～300 μg·mL-1时，可显著促进游动孢子的萌发，抑制孢子囊的萌发；在无荔枝多酚的PDA培养基上荔枝霜疫霉不易产生卵孢子，当培养基中荔枝多酚质量浓度达到100 μg·mL-1时，荔枝霜疫霉产生卵孢子为10.8 mm-2。【结论】荔枝多酚类物质参与荔枝霜疫霉生长发育的调控，抑制霜疫霉生长和产生孢子囊，具有开发新型安全性生物源杀菌剂的潜力。

【期刊名称】《华南农业大学学报》 【年(卷),期】2019(040)006 【总页数】6

【关键词】 荔枝多酚；荔枝霜疫霉；生长发育；溶剂浸提法；生物源杀菌剂 张荣, 徐丹丹, 江立群, 等. 荔枝果皮多酚对荔枝霜疫霉生物学特性的影响[J]. 华南农业大学学报, 2019, 40(6)： 82-87.

ZHANG Rong, XU Dandan, JIANG Liqun, et al. Effects of litchi pericarp polyphenols on biological characteristics of Peronophythora litchii[J]. Journal of South China Agricultural University, 2019, 40(6)： 82-87.

网络首发时间：2019-10-28 09：20：34 网

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//kns.cnki.net/kcms/detail/44.1110.s.20191025.0844.020.html

基金项目：国家荔枝龙眼产业技术体系资助项目(CARS32)；农业农村部作物病虫鼠害疫情监测与防治经费项目(151821301082351701)

由荔枝霜疫霉Peronophythora litchii引起的霜疫病是荔枝的一种重要病害，可严重影响荔枝的生产和采后保鲜。在田间自然环境中，该病原菌主要以孢子囊和游动孢子的形式经流水和液滴飞溅传播，以卵孢子的形式在土壤和落果上越冬[1]。防治霜疫病以使用化学药剂为主[2-3]。但化学药剂的大量使用不仅污染环境，还会导致病原菌产生抗药性，因此急需开发环境友好型杀菌剂。 荔枝多酚作为荔枝体内重要的次生代谢产物，广泛存在于荔枝叶片、果皮和果核中，其不但具有降糖、抗癌、抗氧化等活性[4-5]，还具有抗细菌和抗病毒活性，例如木犀草素(Luteolin，荔枝叶片多酚类物质)对金黄色葡萄球菌Staphylococcus aureus、大肠埃希菌Escherichia coli、痢疾志贺氏菌Shigella dysenteriae等具有很强的抑制作用[6]；原花青素A(A-type proanthocyanidins，荔枝种子多酚类物质)在体外具有抗单纯疱疹病毒(Herpes simplex virus-1)和柯萨奇病毒(Coxsackie virus B3)的活性[7]。荔枝多酚抗植物病原菌活性鲜有报道。植物多酚具有很强的抗真菌活性，Wang等[8]报道甜樱桃多酚类物质可以抑制链格孢Alternaria alternata生长和交链孢菌酮酸的积累；Xu等[9]研究了18种合成或天然酚类物质对货架期葡萄灰霉病的控制作用，表明紫檀芪和白皮杉醇能显著减轻灰霉病害发生的严重程度。关于荔枝多酚对荔枝霜疫霉及霜疫病的作用效果鲜见报道。本文通过纯培养条件

研究荔枝多酚对霜疫霉生长、产孢、孢子萌发、卵孢子产生等方面的影响，以期为荔枝霜疫病的发生流行和开发荔枝多酚类生物源杀菌剂研究奠定理论基础。

1 材料和方法

1.1 供试菌株

荔枝霜疫霉菌株(编号SHS3)为华南农业大学农学院植物病理学系真菌研究室分离、鉴定和保存。

1.2 荔枝果皮多酚的抽提及含量测定

1.2.1 多酚物质的抽提 参考王敏等[10]的方法并略加改进，取黑叶荔枝的果皮，用粉碎机研磨粉碎后置于干燥器中保存。称取荔枝果皮粉末0.2 g，加入70%(φ)的乙醇溶液15 mL及少许CaCO3，浸提24 h，在45 ℃下超声波(700 W)提取15 min，5 000 r·min-1离心 10 min，再加入 5 mL 70%(φ)乙醇溶液提取2次，合并浸提液，将浸提液真空浓缩，除去乙醇备用。

1.2.2 多酚含量的测定 多酚含量的测定采用福林-酚比色法[11]。精密称取没食子酸标准品(美国sigma公司)0.1 g，用去离子水定容至100 mL。将此溶液稀释成质量浓度为500.000、250.000、125.000、62.500、31.250、15.625 μg·mL-1的溶液，各质量浓度梯度的溶液分别取20 μL于5 mL试管中，加入1.8 mL 2 mol·L-1的福林-酚试剂 (购自 Fluka 公司)，放置5 min后加入1.2 mL 15%(w) Na2CO3溶液，在40 ℃烘箱中保温30 min后，测定D760 nm，绘制标准曲线，并进行线性回归分析。

取果皮浸提液20 μL按上述同样的步骤和方法测定浸提液的D760 nm，进而求出抽提得到的多酚总含量。 1.3 荔枝多酚对荔枝霜疫霉的影响