江西***药业股份有限公司GMP文件
检验操作规程
题目：草豆蔻原药材检验操作规程 编号：TS-GC-YL-20570-02 制定人： 制定日期2024 年 月 日 版本：2 页数：1/4 审核人： 审核日期2024 年 月 日 颁发部门：质 量 部 批准人： 批准日期2024年 月 日 生效日期2024 年 月 日 目的：规范草豆蔻原药材检验操作 范围：草豆蔻原药材检验 分发部门： 质量部、 化验室、生产部 标 题 正 文 1 标准依据：《中国药典》2024年版一部及四部 2 【性状】 2.1 仪器：直尺。 2.2 方法：取本品,置日光下观察,并用直尺测量:本品为类球形的种子团，直 径1.5～2.7cm。表面灰褐色，中间有黄白色的隔膜，将种子团分成3瓣，每瓣有种子多数，粘连紧密，种子团略光滑。种子为卵圆状多面体，长3～ 5mm，直径约3mm，外被淡棕色膜质假种皮，种脊为一条纵沟，一端有种脐； 质硬，将种子沿种脊纵剖两瓣，纵断面观呈斜心形，种皮沿种脊向内伸入 部分约占整个表面积的1/2；胚乳灰白色。气香，味辛、微苦。 【鉴别】 3 （1）显微鉴别 3.1 仪器与试剂：生物显微镜、酒精灯，水合氯醛、稀甘油等。 3.1.1 方法：取本品适量，用水合氯醛装片，置显微镜下观察：（1）本品横 3.1.2 切面：假种皮有时残存，为多角形薄壁细胞。种皮表皮细胞类圆形，壁较 厚；下皮为1～3列薄壁细胞，略切向延长；色素层为数列棕色细胞，其间 散有类圆形油细胞1～2列，直径约50μm；内种皮为1列栅状厚壁细胞， 棕红色，内壁与侧壁极厚，胞腔小，内含硅质块。外胚乳细胞含淀粉粒和 草酸钙方晶及少数细小簇晶。内胚乳细胞含糊粉粒。 粉末黄棕色。种皮表皮细胞表面观呈长条形，直径约至30μm，壁稍厚， 常与下皮细胞上下层垂直排列；下皮细胞表面观长多角形或类长方形。色 素层细胞皱缩，界限不清楚，含红棕色物，易碎裂成不规则色素块。油细 胞散生于色素层细胞间，呈类圆形或长圆形，含黄绿色油状物。内种皮厚 壁细胞黄棕色或红棕色，表面观多角形，壁厚，非木化，胞腔内含硅质块； 断面观细胞1列，栅状，内壁及侧壁极厚，胞腔偏外侧，内含硅质块。外 胚乳细胞充满淀粉粒集结成的淀粉团，有的包埋有细小草酸钙方晶。内胚 乳细胞含糊粉粒和脂肪油滴。 （2）薄层鉴别 3.2 3.2.1 仪器与试剂：分析天平、数显恒温水浴锅、电热鼓风干燥箱、层析缸、硅胶G薄层板、乙酸乙酯、甲苯、甲醇等。 方法：（2）取本品粉末1g，加甲醇5ml，置水浴中加热振摇5分钟，3.2.2 滤过，取滤液作为供试品溶液。另取山姜素对照品、小豆蔻明对照品，加 甲醇制成每1ml各含2mg的混合溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法（通 则0502）试验，吸取上述两种溶液各5μl，分别点于同一硅胶G薄层板上， 以甲苯-乙酸乙酯-甲醇（15:4:1）为展开剂，展开，取出，晾干，在100℃ 加热至斑点显色清晰，置紫外光灯（365nm）下检视。供试品色谱中，在与
第 1 页 共 4 页
江西***药业股份有限公司GMP文件
4 4.1 4.1．1 4.1.2 4.1.3 4.2 4.2.1 4.2.2 4.2.3 4.3 4.3.1 4.3.2
山姜素对照品色谱相应的位置上，显相同的浅蓝色荧光斑点；喷以5%三氯化铁乙醇溶液，供试品色谱中，在与小豆蔻明对照品色谱相应的位置上，显相同的褐色斑点。 【检查】 水分 不得过18.0%（通则0832第二法）。 仪器：电热鼓风干燥箱、分析天平、等。 方法：取供试品2-5g，平铺于干燥至恒重的扁形称量瓶中，厚度不超过5mm，疏松供试品不超过10mm，精密称定，打开瓶盖在100－105℃干燥5小时，将瓶盖盖好，移置干燥器中，冷却30分钟，精密称定重量，再在上述温度干燥1小时，冷却，称重至连续两次称重的差异不超过5mg为止。根据减失的重量，计算供试品中的含水量（%）。 计算公式： W样+W0－W1 样品含水量% = ×100% W样 式中： W0 ---------------------------- 称量瓶的重量（g）。 W1 --------------------------- 称量瓶与样品的重量（g）。 W样 --------------------------- 样品的重量（g）。 总灰分 不得过5.0％（通则2302）。 仪器：粉碎机、药筛、分析天平、坩埚、箱式电阻炉等。 方法：取供试品2～3g，过二号筛混合均匀后，置炽灼至恒重的坩埚中称定重量，缓缓炽热，注意避免燃烧，至完全炭化时，逐渐升高温度至500～600℃，使完全灰化至恒重。根据残渣重量，计算供试品中总灰分的含量（%）。 计算公式： W1-W0 总灰分% = ×100% W样 式中： W0 ----------- 坩埚重量(g)。 W1----------- 坩埚与灰分的重量(g)。 W样----------- 样品的重量(g)。 二氧化硫残留量：照二氧化硫残留量测定法（通则 2331)测定，不得过150mg/kg 仪器与试剂：两颈圆底烧瓶、电热套、竖式回流冷凝管、磁力搅拌器、分析天平、甲基红乙醇溶液指示剂、氢氧化钠滴定液滴、盐酸溶液（6mol/L)等。 方法：测定法取药材或饮片细粉约10g(如二氧化硫残留量较髙，超过1000mg/kg，可适当减少取样量，但应不少于5g),精密称定，置两颈圆底烧瓶中，加水300?400ml。打开回流冷凝管开关给水，将冷凝管的上端二氧化硫气体导出口处连接一橡胶导气管置于100ml锥形瓶底部。锥形瓶内加入3%过氧化氢溶液50ml作为吸收液（橡胶导气管的末端应在吸收液液面以下）。使用前，在吸收液中加人3滴甲基红乙醇溶液指示剂（2.5mg/ml),并用0.Olmol/L氢氧化钠滴定液滴定至黄色（即终点；如果超过终点，则应舍弃该吸收溶液）。开通氮气，使用流量计调节气体流量至约0.2L/min； 第 2 页 共 4 页
江西***药业股份有限公司GMP文件
4.3.3 5 5.1 5.1.1 5.1.2 5.1.3 5.2 5.2.1 5.2.2
打开分液漏斗的活塞，使盐酸溶液（6mol/L)10ml流入蒸馏瓶，立即加热两颈烧瓶内的溶液至沸，并保持微沸；烧瓶内的水沸腾1.5小时后，停止加热。吸收液放冷后，置于磁力搅拌器上不断搅拌，用氢氧化钠滴定（O.Olmol/L)滴定，至黄色持续时间20秒不褪，并将滴定的结果用空白实验校正。 计算公式： （V供-V空）×C×0.032×106 二氧化硫残留量（mg/kg） = W供 式中： V供为供试品溶液消耗氢氧化钠滴定液的体积，ml； V空 为空白消耗氢氧化钠滴定液的体积，ml； C 为氢氧化钠滴定液的浓度，mol/L； W供为供试品的重量，g。 0.032为lml氢氧化钠滴定液（lmol/L)相当的二氧化硫的质量，g。 【含量测定】 挥发油 照挥发油测定法（通则2204）测定。本品含挥发油不得少于1.0%（ml/g）。 仪器与试剂：挥发油测定装置、分析天平、电热套等。 方法：取供试品30～50g，称定重量（准确至0.O1g），置烧瓶中，加水300～500ml（或适量）与玻璃珠数粒，振摇混合后，连接挥发油测定器与回流冷凝管。自冷凝管上端加水使充满挥发油测定器的刻度部分，并溢流入烧瓶时为止。置电热套中或用其他适宜方法缓缓加热至沸，并保持微沸约5小时，至测定器中油量不再增加，停止加热，放置片刻，开启测定器下端的活塞，将水缓缓放出，至油层上端到达刻度0线上面5mm处为止。放置1小时以上，再开启活塞使油层下降至其上端恰与刻度0线平齐，读取挥发油量，并计算供试品中挥发油的含量（％）。 计算公式： V 含量% = ×100% 式中： M样 V --------------- 体积（ml） M样 -------------取样量（g） 山姜素、乔松素、小豆蔻明与桤木酮 照高效液相色谱法（通则0512）测定。本品按干燥品计算，含山姜素（C16H14O4）、乔松素（C15H12O4）和小豆蔻明（C16H14O4）的总量不得少于1.35%，桤木酮（C19H18O）不得少于0.50%。 仪器与试剂：电子分析天平、高效液相色谱仪、甲醇等。 色谱条件与系统适用性试验 以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以甲醇为流动相A，以水为流动相B，按下表中的规定进行梯度洗脱，检测波长为300nm。理论板数按小豆蔻明峰计算应不低于5000。 时间（分钟） 流动相A（%） 流动相B（%） 第 3 页 共 4 页
江西***药业股份有限公司GMP文件
0～20 60 40 20～21 60→74 40→26 21～31 74 26 31～32 74→80 26→20 32～42 80 20 42～45 80→95 20→5 5.2.3 对照品溶液的制备 取山姜素对照品、乔松素对照品、小豆蔻明对照 品、桤木酮对照品适量，精密称定，加甲醇分别制成每1ml含山姜素、乔 松素、小豆蔻明各40μg，桤木酮80μg的溶液，即得。 5.2.4 供试品溶液的制备 取本品粉末（过三号筛）约0.5g，精密称定，置 具塞锥形瓶中，精密加入甲醇50ml，称定重量，超声处理（功率250W，频 率40kHz）30分钟，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀， 滤过，取续滤液，即得。 5.2.5 测定法 分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各5μl，注入液相色 谱仪，测定，即得。 本品按干燥品计算，含山姜素（C16H14O4）、乔松素（C15H12O4）和小 豆蔻明（C16H14O4）的总量不得少于1.35%，桤木酮（C19H18O）不得少于0. 50%。 5.2.6 计算公式： A样 × C对 ×f 含量% = ×100% m ×（1－水分）×A对 式中： A样 ------------------------- 样品的面积。 A对 ------------------------ - 对照品的面积。 C对 ------------------------- 对照品的浓度(mg/ml)。 m ------------------------- 样品的重量（g）。 f ------------------------- 稀释体积。
第 4 页 共 4 页
YL-20570草豆蔻原料检验操作规程
