酵母细胞的固定化

酵母细胞的固定化(教学案)(总8

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课题4 酵母细胞的固定化

1．基础知识

1．固定化酶的应用实例――生产高果糖浆 （1）高果糖浆的生产原理： 葡萄糖异构酶 葡萄糖 果糖 （2）葡萄糖异构酶固定：将葡萄糖异构酶固定在颗粒状载体上，装入反应柱中。

（3）高果糖浆的生产操作（识图4－5反应柱）：

从反应柱上端注入葡萄糖溶液，从下端流出果糖溶液，一个反应柱可连续使用半年。

2．固定化技术的方法（识图4－6固定方法）：

将酶和细胞固定化方法有包埋法、化学结合法和物理吸附法。 【比较】酶和细胞的固定方法和特点 固定对酶 细胞 象 适宜固化学结合法、物理吸包埋法 定法 附法 体积小，固定一种体积大，固定一系列特 酶。 酶。 点 包埋法容易丢失 难以化学结合和吸附 〖思考1〗对固定酶的作用影响较小的固定方法是什么？吸附法。 〖思考2〗将谷氨酸棒状杆菌生产谷氨酸的发酵过程变为连续的酶反应，应当固定（酶、细胞）；若将蛋白质变成氨基酸，应当固定（酶、细胞）。

3．固定细胞的材料：

固定细胞时应当选用不溶于水的多孔性载体材料，如明胶、琼脂糖、海藻酸钠、醋酸纤维素和聚丙烯酰胺等

2．实验设计

1．制备固定化酵母细胞 （1）酵母细胞的活化：

1g干酵母＋10mL蒸馏水→50mL烧杯→搅拌均匀→放置1h，使之活化。 〖思考3〗活化是指让处于休眠状态的微生物重新恢复正常生活状态的过程。

（2）配制CaCl2溶液：

＋150mL蒸馏水→200mL烧杯→溶解备用。 （3）配制海藻酸钠溶液：

海藻酸＋10mL水→50mL烧杯→酒精灯微火（或间断）加热，并不断搅拌，使之溶化→蒸馏水定容到10mL。

〖思考4〗微火加热并不断搅拌的目的是什么？防止海藻酸南焦糊。 （4）海藻酸钠溶液与酵母细胞的混合：

将溶化的海藻酸钠溶液冷却至室温，加入活化酵母细胞液，搅拌后吸入到注射器中。

〖思考5〗为什么要海藻酸钠溶液冷却后才能加入酵母细胞？ 防止高温杀死酵母细胞。

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（5）固定化酵母细胞：

以恒定速度缓慢地将注射器中的溶液滴加到CaCl2溶液中，形成凝胶珠状颗粒。

2．固定化酵母细胞的发酵

（6）冲洗：将固定的酵母细胞凝胶珠用蒸馏水冲洗2～3次。

（7）发酵：150mL10％葡萄糖＋固定化酵母细胞→200mL锤形瓶→密封→25℃发酵24h。

〖思考6〗发酵过程中锥形瓶为什么要密封？ 酵母菌的酒精发酵需要缺氧条件。

〖思考7〗锥形瓶中的气泡和酒精是怎样形成的？酵母菌进行无氧呼吸产生的。

〖思考8〗在利用固定化酶或固定化细胞进行生产的过程中，需要无菌操作码？

需要。

3．发酵操作

配制CaCl2溶液 配制海藻酸钠溶液 酵母细胞的活

将海藻酸钠溶液与酵母细胞的混合

冲洗凝胶珠 固定化酵母细胞 酒精发酵

（四）实例探究

例1关于酵母菌的叙述，正确的是

A．酵母菌在营养物质充足时、环境适宜时，依靠有性生殖进行繁殖 B．酵母菌的代谢类型是异养厌氧型

C．酵母菌的生物膜系统包括细胞膜、核膜、各种的细胞器膜等膜 D．用酵母菌酿酒时，应先密封后通气

解析：酵母菌在环境适宜时进行出芽生殖，环境不良时进行孢子生殖。代谢类型为异养兼性厌氧型。酵母菌细胞为真核细胞，因此具有生物膜系统。在酿酒时，应当先通气后密封。

答案：C

例2研究认为，用固定化酶技术处理污染物是很有前途的，如将大肠杆菌得到的三酯磷酸酶固定到尼龙膜上制成制剂，可用于降解残留在土壤中的有机磷农药，于微生物降解相比，其作用不需要适宜的

A．温度 B．酸碱度 C．水分 D．营养

解析：本题考察酶和细胞的比较，二者的正常活动都需要一定的条件，如温度、酸碱度、水份等，但是酶本身是一种大分子物质，不需要营养，而细胞的生活离不开营养物质。

答案：D

☆综合应用

例3．下列有关固定化技术的叙述，正确的是（ ） A．固定化酶只是在细胞内才能发挥作用

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