第二篇 免疫学应用 1 血清学检测技术 2 细胞免疫反应检测 3 免疫学制备技术 4 免疫学防治
5 免疫学在畜牧业中的应用 第一章 血清学检测技术 1 免疫学检测的类型
(1)血清学检测:抗体或抗原
(2)细胞免疫反应检测:效应细胞的数量或功能 2、血清学反应的特点
(1)特异性:交叉反应程度于区分血清型或亚型。 (2)可逆性:是免疫亲和层析的依据之一。 (3)阶段性:标记抗体技术不存在阶段性。
(4)饱和性:抗体或抗原过多导致前带或后带现象 血清学交叉反应
作为研究物种进化关系的证据之一; 成为某些自身免疫病发生的原因; 是异源疫苗应用的理论基础;
可能给鉴别诊断、预防接种造成干扰或影响
的程度是区分两个菌株(毒株)血清型或血清亚型的重要依据: R= ×100%
r1=异源血清效价1 / 同源血清效价1; r2=异源血清效价2 / 同源血清效价2 抗原抗体反应的可逆性 本质:化学反应动态平衡
原理:抗原与抗体的非共价键结合 应用:免疫亲和纯化 两个概念:
亲和力(affinity):单个结合位点间的作用 亲合力(avidity):多个结合位点间的作用 参与抗原抗体反应的非共价键 影响抗原抗体反应的因素 1抗原抗体的性质和数量
(1)单价抗体与多价(二价)抗体 (2)单克隆抗体与多克隆抗体
2 电解质:常用生理盐水,但禽类需使用10倍浓度的NaCl溶液。 3 温度、pH、电泳、振荡、杂质等 格子学说(lattice theory):形成网格状免疫复合物的第一个条件是抗原抗体必须至少为二价 格子学说(lattice theory):形成网格状免疫复合物的第二个条件是抗原抗体的比例适当 血清学检测方法的类型
1、能产生肉眼直接可见反应的: 包括凝集反应和沉淀反应。
2、不能直接产生可见反应的:
包括补体参与的反应、中和试验和各种标记抗体技术 (荧光抗体技术、酶标抗体技术、胶体金标记抗体技术和放射免疫分析)。 试验方法的特异性和灵敏性
特异性(specificity)是指用某试验检查非患者时出现阴性结果的可能性。 特异性=真阴性/(真阴性+假阳性)。
敏感性(sensitivity)是指用该试验检查患者出现阳性结果的可能性。 灵敏性=真阳性/(真阳性+假阴性)。
患者(阳性)与非患者(阴性)通常是用一种公认可靠的方法即“金标准”(gold standard)方法确定出来的。
各种免疫分析方法的灵敏度
沉淀反应(Precipitation Reactions)
可溶性抗原与相应抗体结合,自发形成肉眼可见的不溶性白色沉淀物 。 液相法:即玻璃管法如Ascoli氏反应 固相法:即凝胶平板法(1%~1.5%琼脂) (1)琼脂扩散:单向或双向 (2)免疫电泳:电泳+双向 (3)火箭免疫电泳:电泳+单向 (4)对流免疫电泳:电泳+双向 (5)免疫沉淀技术 :沉淀+电泳 放射型单向免疫扩散
(Radial Single Immunodiffusion) 双向免疫扩散
(Double Immunodiffusion) 双向免疫扩散的基本反应形式 免疫电泳(immunoelectrophoresis) (单向)火箭免疫电泳
随电泳过程形成一个动态的火箭样沉淀线。 免疫(共)沉淀技术 放射免疫沉淀技术 (1)放射标记抗原
(2)加入抗体及固相化的抗体结合蛋白(如Sepharose-SPA)沉淀抗原 (3)离心获免疫复合物 (4)SDS-PAGE或双相电泳 (5)X光胶片显影 常规免疫沉淀技术 (1)未标记抗原
(2)加入抗体及固相化的抗体结合蛋白(如Sepharose-SPA)沉淀抗原 (3)离心获免疫复合物 (4)SDS-PAGE或双相电泳 (5)免疫转印分析
凝集反应(Agglutination Reactions)
参与凝集反应的抗原为颗粒性抗原(particulate antigen),如细菌、细胞或其他颗粒化抗原,反应产物呈肉眼可见的团块状或絮状。
直接凝集反应:ABO血型鉴定
间接凝集反应:红细胞、活性炭、乳胶 间接血凝抑制反应:Ab+Ag?+Ag-SRBC 抗球蛋白试验(Coombs试验)
协同凝集反应:Staphylococcus aureus Direct agglutination reactions ABO血型鉴定
布氏杆菌病(Wright test) 沙门氏菌病/伤寒(Widal test) 立克次氏体病(Weil-Felix test) 梅毒(Kahn test):免疫荧光抗体凝集反应 霍乱、猪气喘病、猪丹毒:生长凝集试验 直接血凝反应(Direct Hemagglutination)
using serial two-fold dilution of anti-SRBC serum in tube 1-9 with tube 10 as control 抗SRBC的凝集效价为第3孔所用的血清稀释倍数。 应注意与病毒血凝试验的概念相区别。 全血凝集反应:检测鸡支原体抗体 (正向)间接凝集反应
(Indirect agglutination test) 反向间接凝集反应
(reverse agglutination test) (正向)间接凝集抑制反应
(indirect agglutination inhibiton test) Coombs 试验
主要用于检查单价抗体(不完全抗体或封闭抗体):Rh血型单价抗体、红细胞自身抗体和布氏杆菌单价抗体
原理:抗抗体起到“搭桥”作用。
协同凝集反应
(coagglutination test)
补体结合试验(complement fixation test) 1 原理与步骤
2 细节要求
在进行定量分析时,通常加入2个单位的溶血素(抗SRBC抗体)和4~5个半数溶血单位(CH50)的补体(豚鼠新鲜血清)。 补体结合试验
补体参与的其它血清学反应
1、被动溶血试验(passive hemolysis test)
在预先含有抗原致敏SRBC及补体的琼脂平板上打孔,使孔内的抗体扩散。也称作单向
免疫学应用
![](/skin/haowen/images/icon_star.png)
![](/skin/haowen/images/icon_star.png)
![](/skin/haowen/images/icon_star.png)
![](/skin/haowen/images/icon_star.png)