免疫学应用

由天下分享时间：2024/9/11 8:57:26 加入收藏我要投稿点赞

第二篇免疫学应用 1 血清学检测技术 2 细胞免疫反应检测 3 免疫学制备技术 4 免疫学防治

5 免疫学在畜牧业中的应用第一章血清学检测技术 1 免疫学检测的类型

（1）血清学检测：抗体或抗原

（2）细胞免疫反应检测：效应细胞的数量或功能 2、血清学反应的特点

（1）特异性：交叉反应程度于区分血清型或亚型。（2）可逆性：是免疫亲和层析的依据之一。（3）阶段性：标记抗体技术不存在阶段性。

（4）饱和性：抗体或抗原过多导致前带或后带现象血清学交叉反应

作为研究物种进化关系的证据之一；成为某些自身免疫病发生的原因；是异源疫苗应用的理论基础；

可能给鉴别诊断、预防接种造成干扰或影响

的程度是区分两个菌株（毒株）血清型或血清亚型的重要依据： R＝ ×100％

r1＝异源血清效价1 / 同源血清效价1； r2＝异源血清效价2 / 同源血清效价2 抗原抗体反应的可逆性本质：化学反应动态平衡

原理：抗原与抗体的非共价键结合应用：免疫亲和纯化两个概念：

亲和力（affinity）：单个结合位点间的作用亲合力（avidity）：多个结合位点间的作用参与抗原抗体反应的非共价键影响抗原抗体反应的因素 1抗原抗体的性质和数量

（1）单价抗体与多价（二价）抗体（2）单克隆抗体与多克隆抗体

2 电解质：常用生理盐水，但禽类需使用10倍浓度的NaCl溶液。 3 温度、pH、电泳、振荡、杂质等格子学说（lattice theory）：形成网格状免疫复合物的第一个条件是抗原抗体必须至少为二价格子学说（lattice theory）：形成网格状免疫复合物的第二个条件是抗原抗体的比例适当血清学检测方法的类型

1、能产生肉眼直接可见反应的：包括凝集反应和沉淀反应。

2、不能直接产生可见反应的：

包括补体参与的反应、中和试验和各种标记抗体技术（荧光抗体技术、酶标抗体技术、胶体金标记抗体技术和放射免疫分析）。试验方法的特异性和灵敏性

特异性（specificity）是指用某试验检查非患者时出现阴性结果的可能性。特异性＝真阴性/（真阴性+假阳性）。

敏感性（sensitivity）是指用该试验检查患者出现阳性结果的可能性。灵敏性=真阳性/（真阳性+假阴性）。

患者（阳性）与非患者（阴性）通常是用一种公认可靠的方法即“金标准”（gold standard）方法确定出来的。

各种免疫分析方法的灵敏度

沉淀反应（Precipitation Reactions）

可溶性抗原与相应抗体结合，自发形成肉眼可见的不溶性白色沉淀物。液相法：即玻璃管法如Ascoli氏反应固相法：即凝胶平板法（1%~1.5%琼脂）（1）琼脂扩散：单向或双向（2）免疫电泳：电泳＋双向（3）火箭免疫电泳：电泳＋单向（4）对流免疫电泳：电泳＋双向（5）免疫沉淀技术：沉淀＋电泳放射型单向免疫扩散

（Radial Single Immunodiffusion）双向免疫扩散

（Double Immunodiffusion）双向免疫扩散的基本反应形式免疫电泳（immunoelectrophoresis）（单向）火箭免疫电泳

随电泳过程形成一个动态的火箭样沉淀线。免疫（共）沉淀技术放射免疫沉淀技术（1）放射标记抗原

（2）加入抗体及固相化的抗体结合蛋白（如Sepharose-SPA）沉淀抗原（3）离心获免疫复合物（4）SDS-PAGE或双相电泳（5）X光胶片显影常规免疫沉淀技术（1）未标记抗原

（2）加入抗体及固相化的抗体结合蛋白（如Sepharose-SPA）沉淀抗原（3）离心获免疫复合物（4）SDS-PAGE或双相电泳（5）免疫转印分析

凝集反应（Agglutination Reactions）

参与凝集反应的抗原为颗粒性抗原（particulate antigen），如细菌、细胞或其他颗粒化抗原，反应产物呈肉眼可见的团块状或絮状。

直接凝集反应：ABO血型鉴定

间接凝集反应：红细胞、活性炭、乳胶间接血凝抑制反应：Ab+Ag?+Ag-SRBC 抗球蛋白试验（Coombs试验）

协同凝集反应：Staphylococcus aureus Direct agglutination reactions ABO血型鉴定

布氏杆菌病（Wright test）沙门氏菌病/伤寒（Widal test）立克次氏体病（Weil-Felix test）梅毒（Kahn test）：免疫荧光抗体凝集反应霍乱、猪气喘病、猪丹毒：生长凝集试验直接血凝反应（Direct Hemagglutination）

using serial two-fold dilution of anti-SRBC serum in tube 1-9 with tube 10 as control 抗SRBC的凝集效价为第3孔所用的血清稀释倍数。应注意与病毒血凝试验的概念相区别。全血凝集反应：检测鸡支原体抗体（正向）间接凝集反应

（Indirect agglutination test）反向间接凝集反应

（reverse agglutination test）（正向）间接凝集抑制反应

（indirect agglutination inhibiton test） Coombs 试验

主要用于检查单价抗体（不完全抗体或封闭抗体）：Rh血型单价抗体、红细胞自身抗体和布氏杆菌单价抗体

原理：抗抗体起到“搭桥”作用。

协同凝集反应

（coagglutination test）

补体结合试验（complement fixation test） 1 原理与步骤

2 细节要求

在进行定量分析时，通常加入2个单位的溶血素（抗SRBC抗体）和4~5个半数溶血单位（CH50）的补体（豚鼠新鲜血清）。补体结合试验

补体参与的其它血清学反应

1、被动溶血试验（passive hemolysis test）