乳积方抑制乳腺癌细胞株MDA-MB-231及MCF-7体外
增殖的研究
李宏良，田华琴，梁贵文，陈学彰，王斌，杨耀林，黄泳立，朱志霞，陈锡康 【摘 要】【摘要】目的 探讨乳积方对乳腺癌细胞株MDA-MB-231及MCF-7体外增殖的影响。方法 体外常规培养人乳腺癌细胞MDA-MB-231及MCF-7，分别加入不同浓度梯度（0.2 g/ml，0.1 g/ml，0.05 g/ml，0.025 g/ml，0.0125 g/ml，0.00 625 g/ml）的乳积方药液，处理72h。采用四氮唑蓝（MTT）比色法检测细胞增殖。倒置显微镜下观察细胞形态的变化且拍照。设不加乳积方药液常规培养为空白对照组、人乳腺正常细胞MCF-10A为阴性对照组。结果 倒置显微镜下观察不同药物浓度处理后的乳腺癌细胞和正常细胞均受到了增殖抑制。将三组细胞（人乳腺正常细胞MCF-10A及人乳腺癌细胞株MDA-MB-231、MCF-7）的药物浓度与细胞存活率数据做散点图并用趋势线拟合分别得到方程y=0.015 01x-0.814 33（R2=0.873 03），y=-0.308 62 ln 4.449 09x（R2=0.897 13），y=-0.351 51 ln 4.357 06x（R2=0.944 23），其中x代表药物浓度，y代表细胞存活率。计算细胞IC50值时，三种模型对应的药物浓度依次是0.013 g/ml，0.044 g/ml，0.055 g/ml。结论 MDA-MB-231细胞的IC50值低于MCF-7细胞。初步说明乳积方制剂对MDA-MB-231细胞具有更显著的增殖抑制作用。 【期刊名称】《中医肿瘤学杂志》 【年(卷),期】2019(000)003 【总页数】5
【关键词】【关键词】乳积方；乳腺癌；MCF-10A细胞；MDA-MB-231细胞；
MCF-7细胞
基金项目：广东省中医药局重点项目（编号：20173015）。
乳积方是佛山市中医院肿瘤中心用以防治乳腺癌复发转移的经验方。前期研究发现乳积方对乳腺癌化疗后的患者具有增效减毒及提高机体免疫功能的作用，并可改善乳腺癌术后患者的无疾病生存时间及生活质量[1-3]。为进一步分析乳积方对不同类型乳腺癌的影响，本研究选取乳腺癌细胞株MDA-MB-231及MCF-7进行了以下体外试验。
1 材料
1.1 药物及试剂 乳积方由柴胡、白芍、党参、八月札、瓜蒌皮、浙贝、穿山甲、海藻等组成，购自广州至信药业有限公司。RPMI-1640培养液和胎牛血清为GIBCO公司产品。四氮唑蓝（MTT）为Sigma公司产品。
1.2 细胞株 人乳腺癌细胞MDA-MB-231、人乳腺癌细胞MCF-7、人乳腺正常细胞MCF-10A由中山大学肿瘤医院提供。
1.3 仪器 CO2培养箱（一恒BPN-80CH），离心机（中科中佳 SC-3612），超净工作台（新加坡ESCO），倒置荧光显微镜（奥特光学BDS400），自动酶标仪（ThermosMultiskan FC），电子天平（奥豪斯仪器有限公司CP-214）。
2 方法
2.1 药物的制备 乳积方由柴胡10 g、白芍15 g、党参15 g、八月札15 g、瓜蒌皮15 g、浙贝10 g、穿山甲10 g、海藻15 g等组成，药材经品种鉴定后用文火煎煮两次，合并药液，过滤，弃去药渣，将滤液煎煮浓缩至每1 ml含生药2 g。取适量药液用无菌水将乳积方配制成2 mg/mL的浓度，以0.22 μm孔径微孔滤膜过滤器过滤除菌，置4℃冰箱保存备用。
2.2 细胞培养 人乳腺癌细胞MDA-MB-231、人乳腺癌细胞MCF-7、人乳腺正常细胞MCF-10A三种细胞株在37℃，5%CO2饱和湿度条件下，用含有链霉素（50 units/mL），青霉素（100 units/mL）、胎牛血清（10%）等试剂的培养基DMEM培养。根据细胞生长状态达到培养瓶80%空间密度按照常规的细胞传代方法传代。
2.3 分组及乳积方药物处理细胞 以人乳腺癌细胞MDA-MB-231、人乳腺癌细胞MCF-7为观察组，取对数期生长的细胞，按照2.0×104细胞/孔接种于96孔板。在5%CO2和37℃下培养24 h后，细胞单层铺满96孔板底，加入不同浓度梯度（0.2 g/ml，0.1 g/ml，0.05 g/ml，0.025 g/ml，0.0125 g/ml，0.006 25 g/ml）的乳积方药液，每孔100 μl，设3个复孔。37℃，5%CO2饱和湿度条件下处理72 h。倒置显微镜下观察细胞形态的变化且拍照。同时设不加乳积方药液常规培养为空白对照、人乳腺正常细胞MCF-10A为阴性对照。 2.4 MTT实验 取待测细胞，于培养体系内加入5 mg/mL MTT液20 ul，置37℃，5%CO2饱和湿度培养箱中培养4 h。小心吸去孔内培养液，加入每孔150 ul二甲基亚砜（DMSO），微量振荡器振荡10 min。选择570 nm波长，在自动酶标仪上检测各孔光吸收值（OD值）。 2.5 数据分析
2.5.1 细胞存活率的计算 每个MTT实验重复3次取平均值。以每种细胞未经过乳积方药物处理的细胞MTT实验数值为细胞正常值。细胞存活率（%）=（不同浓度乳积方处理后的细胞MTT实验OD值/细胞正常OD值）×100%。每种细胞获得6个浓度下的存活率数据。
2.5.2 半数抑制率（IC50）的计算 对于每种细胞来说，使用以上6个浓度的细
乳积方抑制乳腺癌细胞株MDA-MB-231及MCF-7体外增殖的研究
