VEGF165的载体构建、表达及其生物学活性
陈小波;黄锡全;张隆;马艳春;孙健;季青;康向东
【摘 要】目的:构建血管内皮生长因子(VEGF)165原核表达载体,在大肠杆菌中表达,获得重组VEGF165,并通过细胞和鸡胚尿囊膜试验鉴定其生物学活性.方法: 本实验室保存的T-VEGF165质粒,经BamHⅠ和EcoRⅠ双酶切,将其克隆至原核表达载体pET28a(+)中,获得含人VEGF165全序列基因的表达载体pET28a(+)-VEGF165,将其转化至大肠杆菌BL21(DE3),用IPTG诱导表达,对表达产物进行纯化,获得VEGF165蛋白.通过体外促进HUVEC细胞增殖及鸡胚尿囊膜血管增生实验鉴定其生物学活性.结果:成功构建了VEGF165蛋白的原核表达载体,表达纯化了VEGF165蛋白,经过细胞增殖试验及鸡胚尿囊膜血管增生实验,证明该蛋白具有良好的促进血管内皮细胞增殖的生物学活性.结论:成功地获得了人VEGF165重组蛋白,并证实了该蛋白具有促进血管内皮细胞增殖活性. 【期刊名称】《江苏大学学报（医学版）》 【年(卷),期】2007(017)002 【总页数】3页(P121-123)
【关键词】血管内皮细胞生长因子;鸡胚尿囊膜;血管内皮细胞 【作 者】陈小波;黄锡全;张隆;马艳春;孙健;季青;康向东
【作者单位】江苏大学医学技术学院,江苏,镇江,212001;上海中医药大学附属普陀医院,上海,200062;江苏大学医学技术学院,江苏,镇江,212001;上海中医药大学附属普陀医院,上海,200062;上海中医药大学附属普陀医院,上海,200062;上海中医药大
学附属普陀医院,上海,200062;上海中医药大学附属普陀医院,上海,200062;上海中医药大学附属普陀医院,上海,200062 【正文语种】中 文 【中图分类】医药卫生
【文献来源】https://www.zhangqiaokeyan.com/academic-journal-cn_journal-jiangsu-university-medicine-edition_thesis/0201244718317.html
第 17 卷第 2 期2007 年 3 月 江苏 大 学 学 报（ 医学版）Joumalof Jiangsu University(MedicineEdition) Vol.17No.2Mar.2007 VEGF165的 载体构建 、 表 达 及 其 生 物 学 活 性 k陈小 波1'2 ， 黄锡 全 1， 张 隆 2 ， 马艳 -2， 孙 健 2 ， 季 青 2 ， 康 向 东 2（
1 ． 江苏大学医学技术学院，江苏 镇江 212001 ；
2 ． 上海中医药大学附属普陀医院，上海 200062 ） [ 摘 要] 目的： 构建血管内皮生长因子( VEGF)165 原核表达载体，在大肠杆菌中表达 ，获得重组 VEGF165 ，并通过细胞和鸡胚尿囊膜试验鉴定其生物学活性。 方法 ： 本实验室保存的 T-VEGFj65 质粒，经 BamHI和 EcoRI ．双酶切 ，将其 克隆至原核表达载体
pET28a(+) 中，获得含人 VEGF ． 酤全序列基因的表誓 载体 pET28a(+)-VEGF ， 矸 ，将其转化至大 肠杆菌 BI21(DE3)，用 lPTG 诱导表达 ，对表达产物进行纯化，获得 VEGFI65 蛋白。 通过体外促进 HUVEC 细胞增殖及 鸡胚尿囊膜血管增生实验鉴定其生物学活性。 结果： 成功构建了 VECFl65 蛋白的原核表达载体，表达纯化了 VEGF ． 酗 蛋白，经过细胞增殖试验及鸡胚尿囊膜血管增生实验，证明该蛋白具有 良好的促进血管内皮细胞增殖的生物学活性。 结论 ： 成功地获得了人 VEGF165 重组蛋白，并证实了该蛋白具有促进血管内皮细胞增殖活性。【 关键词】
血管内皮细胞生长因子 ；鸡胚尿囊膜；血管内皮细胞 [ 中图分类号]R392. 12[ 文献标识码 ]A[文章编号】 1671-778312007 ） 02- 0121 -03 Expression and biologicalactivity test of theVEGF165 CHEN Xiao-bo''2 ,HUANGXi-qu.an' ,ZHANGLong2,MAYan_chun2,SUNjian2,JIQing2,K4NGXiang-dong2 ( 1.School of MedicalTechnologyofJiangsu University.ZhenjiangJiangsu 212001; 2.PutuoHospitalAffiliatedShanghaiUniversity of Tradi- tional ChineseMedicine,Shanghai200062,China) [Abstract]
Objective:Toconstructexpressionvectorof vascularendothelial
growthfactorIM,andex- pressin Escherichiacoli (E.coli). Thebiologicalactivity ofthisprotein wastestedby celltest andeffectof
chickenembryoallantoicmembrane(CAM). Methods:T-VEGFI65wasdigested by restrictionendonucle- ases, Thenitwasclonedinto pET-28a( +) expressionvector, andtransformed into Escherichiacoli(E. coli)DH5a.TheplasmidDNAwasextracted,andTherightinsertion
wasretransformedinto E.coliBL21 (DE3).Thecultures inducedbyIsopropy-p-D-thiogalactoside(IPTG)waspurified andrenaturated onthe Nj2+-NTA resin.Thehiological activity of VEGF165wastested throughthe effect onproliferationof human J umbilicalvascular endothelialcell (HUVEC)andthe CAM. Results:ExpressionrecombinantsofVEGF165 were obtained.This proteinhasthe biologicalactivityof
promoteangiogenesis.Conclusion:TheVEGF165 expressedin E.coli, andthe protein possessesthe activity of promoteangiogenesis [Key words] VEGF;CAM;HUVEC血管内皮生长因子 (vascular endothelial growth factor ，VEGF)于 1989 年发现 ， 是一种与血管生长有关的特异性的细胞因子 ， 具有促进
VEGF165的载体构建、表达及其生物学活性
