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2013年高三生物实验专题复习（一）
考试说明 ：实验与探究能力
（1）能独立完成“生物知识内容表”所列的生物实验，包括理解实验目的、原理、方 法和操作步骤，掌握相关的操作技能，并能将这些实验涉及的方法和技能进行综合的运用。 （2）具备验证简单生物学事实的能力，并能对实验现象和结果进行解释、分析和处理。（3）具有对一些生物学问题进行初步探究的能力，包括运用观察、实验与调查，假说演绎、建立模型与系统分析等科学研究方法。
（4）能对一些简单的实验方案做出恰当的评价和修订。
一、观察DNA和RNA在细胞中的分布
1、实验原理：
(1)真核细胞的DNA主要分布在细胞核内，RNA主要分布在细胞质中。
(2)甲基绿和吡罗红两种染色剂对DNA和RNA的亲和力不同，甲基绿对DNA亲和力强，使DNA显现出绿色，而吡罗红对RNA的亲和力强，使RNA呈现出红色。用甲基绿、吡罗红的混合染色剂将细胞染色，可同时显示DNA和RNA在细胞中的分布。 (3)盐酸的作用:
① 盐酸能改变细胞膜的通透性，加速染色剂的跨膜运输；
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② 盐酸使染色体中的DNA与蛋白质分离，便于DNA与染色剂的结合。
2、实验目的： 初步掌握观察DNA和RNA在细胞中分布的方法
3、实验选材： （1）选用的实验材料既要容易获得，又要便于观察；
（2）常用的观察材料由人的口腔上皮细胞、洋葱鳞片叶内表皮细胞(为避免原有颜色的干扰，不可使用紫色表皮细胞)
(3) 取材要点: ① 取口腔上皮细胞之前，应先漱口，以避免装片中出现太多的杂质；
② 取洋葱表皮细胞时，尽量避免材料上带有叶肉组织细胞。
4、主要步骤(以观察口腔上皮细胞为例)
（1）取材
① 滴： 在洁净的载玻片上滴一滴质量分数为0.9%的NaCl溶液； ② 刮： 用消毒牙签在口腔内侧壁上轻轻地刮下
③ 涂： 将牙签上的碎屑涂抹在载玻片的生理盐水中；
④ 烘： 将涂有口腔上皮细胞的载玻片在酒精灯的火焰上烘干。 （2）水解
① 解： 将烘干的载玻片放入装有30ml质量分数为8%的盐酸的小烧杯中，进行材料的水解；
② 保： 将小烧杯放入装有30℃温水的大烧杯中保温5分钟。 （3）冲洗涂片
① 冲： 用缓缓的蒸馏水冲洗载玻片10秒钟； ② 吸： 用吸水纸吸去载玻片上的水分。 （4）染色
① 染：用2滴吡罗红甲基绿混合染色剂滴在载玻片上，染色5分钟； ② 吸： 吸去多余染色剂； ③ 盖： 盖上盖玻片。 （5）观察
① 低： 在低倍物镜下，寻找染色均匀，色泽浅的区域，移至视野中央，将物像调节清晰；
② 高： 转到高倍物镜，调节细准焦螺旋，观察细胞核和细胞质的染色情况。
二、检测生物组织中的还原糖、脂肪和蛋白质
1、实验原理：
（1）斐林试剂鉴定还原糖时，溶液的颜色变化为：砖红色(沉淀)。斐林试剂只能检验生物组织中还原糖存在与否，而不能鉴定非还原性糖。葡萄糖、麦芽糖、果糖是还原糖
（2）双缩脲试剂的成分是质量浓度为0.1 g／mL的氢氧化钠溶液和质量浓度为0.01 g／mL的硫酸铜溶液。蛋白质可与双缩脲试剂产生紫色反应。
（3）苏丹Ⅲ染液遇脂肪的颜色反应为橘黄色，苏丹Ⅳ染液遇脂肪的颜色反应为红色。 2、实验目的：
尝试用化学试剂检测生物组织中糖类、脂肪和蛋白质 3、实验选材：
（1）做可溶性还原性糖鉴定实验，应选含糖高，颜色为白色的植物组织，如苹果、梨。（因为组织的颜色较浅，易于观察。）
（2）做脂肪的鉴定实验。应选富含脂肪的种子，以花生种子为最好，实验前一般要浸泡3-4小时（也可用蓖麻种子）。
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（3）做蛋白质的鉴定实验，可用富含蛋白质的黄豆或鸡蛋清。
4、实验试剂
斐林试剂（包括甲液：质量浓度为0.1g/ mL NaOH溶液和乙液：质量浓度为0.05g/ mL CuSO4溶液）、苏丹Ⅲ或苏丹Ⅳ染液、 双缩脲试剂（包括A液：质量浓度为0.1g/ mL NaOH溶液和B液：质量浓度为0.01g/ mL CuSO4溶液）、体积分数为50%的酒精溶液，碘液、蒸馏水。
５、方法步骤：
（１）可溶性糖的鉴定
操 作 方 法 1. 制备组织样液。 注 意 问 题 解 释 苹果或梨组织液必须临时制备 因苹果多酚氧化酶含量高，组织液很易（去皮、切块、研磨、过滤） 被氧化成褐色，将产生的颜色掩盖。 2. 取1支试管，向试管内注 入2mL组织样液。 斐林试剂很不稳定，甲、乙液混合保存时，生成的Cu ( OH ) 2在70~900C下分解成黑色CuO和水； 甲、乙液分别加入时可能会与组织样液发生反应，无Cu ( OH ) 2生成。 3. 向试管内注入1mL新制的应将组成斐林试剂的甲液、乙斐林试剂，振荡。 液分别配制、储存，使用前才将甲、乙液等量混匀成斐林试剂； 切勿将甲液、乙液分别加入苹果组织样液中进行检测。 4. 试管放在盛有50-65℃温最好用试管夹夹住试管上部，防止试管内的溶液冲出试管，造成烫水的大烧杯中，加热约2分钟，使试管底部不触及烧杯底部，试伤； 缩短实验时间。 观察到溶液颜色：浅蓝色 → 棕管口不朝向实验者。 色 → 砖红色（沉淀） （２）脂肪的鉴定
操 作 方 法 注 意 问 题 解 释 花生种子浸泡、去皮、切下一些子叶干种子要浸泡3~4小因为浸泡时间短，不易切片，浸泡时薄片，将薄片放在载玻片的水滴中，用时，新花生的浸泡时间可间过长，组织较软，切下的薄片不易成吸水纸吸去装片中的水。 缩短。 形。切片要尽可能薄些，便于观察。 在子叶薄片上滴2~3滴苏丹Ⅲ或苏丹Ⅳ染液，染色1分钟。 用吸水纸吸去薄片周围染液，用50% 酒精洗去浮色，吸去酒精。 染色时间不宜过长。 酒精用于洗去浮色，不洗去浮色，会影响对橘黄色脂肪滴的观察。同时，酒精是脂溶性溶剂，可将花生细胞中的脂肪颗粒溶解成油滴。 滴上清水可防止盖盖玻片时产生气泡。装片不宜久放。 时间一长，油滴会溶解在乙醇中。 用吸水纸吸去薄片周围酒精，滴上 1~2滴蒸馏水，盖上盖玻片。 低倍镜下找到花生子叶薄片的最薄处，可看到细胞中有染成橘黄色或红色圆形小颗粒。 七彩教育网 全国最新初中、高中试卷、课件、教案等教学资源免费下载
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（３）蛋白质的鉴定
操 作 方 法 制备组织样液。 （浸泡、去皮研磨、过滤。） 注 意 问 题 解 释 黄豆浸泡1至2天，容易研磨成浆，也可购新鲜豆浆以节约实验时间。 鉴定。加样液约2ml于试管中，A液和B液也要分开配制，先加NaOH溶液，为Cu2+与蛋白质反应加入双缩脲试剂A，摇匀；再加储存。鉴定时先加A液后加提供一个碱性的环境。A、B液混装或同入双缩脲试剂B液3~4滴，摇匀，B液。 时加入，会导致Cu2+变成Cu ( OH ) 2沉 溶液变紫色。 淀，而失效。 否则CuSO4的蓝色会遮盖反应的真实颜CuSO4溶液不能多加。 色。 可用蛋清代替豆浆。 蛋清要先稀释。 如果稀释不够，在实验中蛋清粘在试管壁，与双缩脲试剂反应后会粘固在试管内壁上，使反应不容易彻底，并且试管也不易洗干净。 以免影响颜色观察 附：淀粉的检测和观察用试管取2ml待测组织样液，向试管内滴加2滴碘液，观察颜色变化。 碘液不要滴太多 三、用显微镜观察多种多样的细胞
１．实验原理：
利用高倍镜可以看到某些在低倍镜下无法看到的细胞结构，例如：可以看到叶绿体、线粒体等细胞器，从而能够区别不同的细胞。 ２、实验目的：
（1）使用高倍显微镜观察几种细胞，比较不同细胞的异同点 （2）运用制作临时装片的方法 ３．方法步骤：
第一步：转动反光镜使视野明亮
第二步：在低倍镜下观察清楚后，把要放大观察的物像移至视野中央 第三步：用转换器转过高倍物镜
第四步：观察并用细胞准焦螺旋调焦。 ４、讨论题：
（1）是低倍镜还是高倍镜的视野大，视野明亮？为什么？
提示：低倍镜的视野大，通过的光多，放大的倍数小；高倍镜视野小，通过的光少，但放大的倍数高。
（2）为什么要先用低倍镜观察清楚后，把要放大观察的物像移至视野的中央，再换高倍镜观察？
提示：如果直接用高倍镜观察，往往由于观察的对象不在视野范围内而找不到。因此，需要先用低倍镜观察清楚，并把要放大观察的物像移至视野的中央，再换高倍镜观察。 （3）用转换器转过高倍镜后，转动粗准焦螺旋行不行？
提示：不行。用高倍镜观察，只需微调即可。转动粗准焦螺旋，容易压坏玻片。 （４）使用高倍镜观察的步骤和要点是什么？
①首先用低倍镜观察，找到要观察的物像，移到视野的中央。
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②转动转换器，用高倍镜观察，并轻轻转动细准焦螺旋，直到看清楚材料为止。
（５）试归纳所观察到的细胞在结构上的共同点，并描述它们之间的差异，分析产生差异的可能的原因： 提示：这些细胞在结构上的共同点是：有细胞膜、细胞质和细胞核，植物细胞还有细胞壁。
各种细胞之间的差异和产生差异的可能原因是：这些细胞的位置和功能不同，其结构与功能相适应，这是个体发育过程中细胞分化产生的差异。 （６）大肠杆菌与你在本实验中观察到的细胞有什么主要区别？
提示：从模式图中可以看出，大肠杆菌没有明显的细胞核，没有核膜，细胞外有鞭毛，等等
四、用高倍镜观察线粒体和叶绿体
１．实验原理：
叶绿体的辨认依据：叶绿体是绿色的，呈扁平的椭圆球形或球形。
线粒体辨认依据：线粒体的形态多样，有短棒状、圆球状、线形、哑铃形等。
健那绿染液是专一性染线粒体的活细胞染料，可以使活细胞中线粒体呈现蓝绿色。 ２．实验目的：
使用高倍镜观察叶绿体和线粒体的形态分布 ３．实验材料：
观察叶绿体时选用：藓类的叶、黑藻的叶。取这些材料的原因是：叶子薄而小，叶绿体清楚，可取整个小叶直接制片，所以作为实验的首选材料。若用菠菜叶作实验材料，要取菠菜叶的下表皮并稍带些叶肉。因为表皮细胞不含叶绿体。 ４．方法步骤：
步 骤 1．制片。用镊子取一片黑藻的小注 意 问 题 分 析 制片和镜检时，临时装片中的叶否则细胞或叶绿体失水收缩，将 叶，放入载玻片的水滴中，盖上盖片不能放干了，要随时保持有水状影响对叶绿体形态和分布的观察。玻片。 态 2．低倍镜下找到叶片细胞 3．高倍镜下观察叶绿体的形态和 分布 4．制作人的口腔上皮细胞临时装在洁净载玻片中央滴一滴健那绿 片 染液→用牙签取碎屑→盖盖玻片 5．观察线粒体 蓝绿色的是线粒体，细胞质接近 无色。 ５、讨论题：
（1）细胞质基质中的叶绿体，是不是静止不动的？为什么？
答：不是。呈椭球体形的叶绿体在不同光照条件下可以运动，这种运动能随时改变椭球体的方向，使叶绿体既能接受较多光照，又不至于被强光灼伤。 （2）叶绿体的形态和分布，与叶绿体的功能有什么关系？
答：叶绿体的形态和分布都有利于接受光照，完成光合作用。如叶绿体在不同光照条件下改变方向。又如叶子上面的叶肉细胞中的叶绿体比下面的多，这可以接受更多的光照。
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福建福州文博中学2013年高三生物实验专题复习.
