HPLC分析6种不同花色滇牡丹花瓣中花青素和黄酮

HPLC分析6种不同花色滇牡丹花瓣中花青素和黄酮*

华梅1,2，原晓龙1,2，杨卫1,2，陈剑1,2，呼延丽1,2，谭芮1,2，杨宇明1，王娟1,2

【摘 要】摘要：滇牡丹是牡丹野生种之一，具有非常丰富的颜色，有白色、黄色、黄绿色、橙色、红色(深红、紫红)、紫色和紫黑色等颜色。采用HPLC和HPLC-DAD-ESI-MS2同时分析6种不同花色滇牡丹花瓣中花青素和黄酮成分，分析并鉴别出4种花青素化合物和7种黄酮化合物。研究表明：除黄色花瓣，其余5种颜色的花瓣中都含有相同种类的花青素，不同颜色花瓣中花青素的相对百分含量差距比较大。首次从滇牡丹粉色系花瓣中分析并鉴定出矢车菊素双葡萄糖苷(cyanidin-3,5-di-O-glucoside)、矢车菊素单葡萄糖苷(cyanidin-3-O-glucoside)、芍药素双葡萄糖苷(peonidin-3,5-di-O-glucoside)和芍药素单葡萄糖苷(peonidin-3-O-glucoside)。6种颜色滇牡丹花瓣中黄酮化合物的种类几乎相同，仅含量有差异。 【期刊名称】西部林业科学 【年(卷),期】2017(046)006 【总页数】6

【关键词】滇牡丹；花青素；黄酮；HPLC-DAD-ESI-MS2

滇牡丹[1](Paeonia delavayi)属芍药科(Paeoniaceae)芍药属(Paeonia)植物，是我国特有的珍稀濒危物种，被列为国家Ⅲ级保护植物[2]。主要分布于云南中部至西北部、四川西南部及西藏东南部，在云南具有非常丰富的资源分布[3]。滇牡丹花色艳丽，拥有牡丹栽培品种中少有的黄色花系基因资源，是栽培牡丹选育黄色花系新品种的重要亲本来源。滇牡丹花色变异类型丰富，除黄色(或花

瓣基部有紫斑)外，还有绿色、黄绿色、橙色、粉色、紫红色、黑紫色等，部分植株花瓣基部出现较大黑紫斑、边缘出现他色镶边、绿色条纹等[4]。栽培牡丹缺乏黄色、绿色重瓣品种，而滇牡丹拥有包括白色、纯黄色、绿色、红色、紫色等珍贵花色基因资源，因此有可能通过杂交育种技术，培育出具自主知识产权的黄色、红色及其他色系的牡丹新品种，丰富中国牡丹品种群的花色[5]。 目前，国内外对滇牡丹的研究主要集中在滇牡丹的多样性和现状研究、滇牡丹的花色类群性状变异分析、野生滇牡丹资源及生态环境现状调查、滇牡丹遗传多样性分析、开花特性观察及滇牡丹内生真菌的研究[3-9]等方面。对滇牡丹的化学成分以及花色素的分析研究鲜有文献报道，仅周琳等[10]对云南野生黄牡丹花色素成分进行了鉴定，对滇牡丹其他花色花瓣中的花色素成分未进行分析。 研究表明，花色素极易提取，且安全无毒，可作为食品添加剂用于食品着色。花色素有较强的抗氧化活性，且有抗肿瘤活性，它可以通过抑制肿瘤细胞的增殖、转移和诱导癌细胞的凋亡实现抗癌作用[11]。此外，花色素在营养保健、防治心血管疾病、抗癌、抗动脉粥样硬化、延缓衰老等方面具有较大的开发利用价值[12-13]。黄酮[14-15]是一种很强的抗氧剂，可有效地清除体内的氧自由基。目前，有文献报道，从牡丹花瓣中分析出花青素[16]、黄酮等化合物[17]。滇牡丹在云南的野生资源比较丰富，目前对滇牡丹的引种驯化工作也正在开展，对滇牡丹的化学成分分析，尤其是其中花色素及黄酮的分析，对滇牡丹资源的利用、滇牡丹产业的发展具有非常重要的意义。本研究首次采用HPLC/HPLC-DAD-ESI-MS2技术对滇牡丹6个不同花色花瓣中花青素和黄酮进行分析，同时对6个不同花色花瓣中花青素种类及相对百分含量进行了分析。

1 材料与方法

1.1 材料

6种颜色的滇牡丹花瓣采自云南省林业科学院树木园。滇牡丹于2014年11月分别从澄江县梁王山(纯黄)、香格里拉高山植物园(黄-橙、紫-红)、昆明西山(黄-紫)、丽江(橙-黄)、香格里拉普达措国家公园(红-橙)引种到云南省林业科学院树木园种植。采集时间为2016年4月14日10：00。新鲜花瓣置于-20℃冰箱保存备用。 1.2 实验方法 1.2.1 花色素的提取

分别取6种花色的新鲜花瓣各0.80g，剪碎，置于具塞试管中，用1︰10(m︰v)70%甲醇溶液(内含1%HCl)，放置于4℃冰箱避光过夜提取。提取液通过针头过滤器(0.45μm)过滤后用于色素分析。 1.2.2 HPLC色谱条件

Agilent 1260用于HPLC分析，HPLC条件为色谱柱Eclipse plus C18column(4.6mm×150mm,5μm),1%冰醋酸(A)和乙腈(B)为洗脱剂。花青素梯度洗脱条件为0-5min,0-20%B;5-10min,20%-40%B;10-20min,40%-60%B；黄酮梯度洗脱条件为0-10min,0-20%B;10-40min,20%-60%B；检测波长为360nm(黄酮)，525nm(花青素)；流速为0.8ml/min；柱温为35℃；进样量为10μL。紫外吸收扫描波长范围为200-600nm。 1.2.3 HPLC-MS2条件

Q-TOF LC/MS 6540用于HPLC-MS2分析，HPLC-MS2分析同时在正负离子模式中进行。花青素在正离子模式下分析，黄酮在负离子模式下分析。质谱参数：裂解电压为135V，毛细管电压为3 500V，氮气作为干燥及雾化气