食品微生物检测方法
范围
本标准规定了食品微生物检测方法 1 菌落总数 1.1 培养基和试剂
⑴、营养琼脂培养基：按GB/T4789.28-2003中4.7规定
成分: 蛋白胨 10克、牛肉膏3克、氯化钠5克、琼脂15～20克 、蒸馏水 1000ml 制法： 将除琼脂以外的各成分溶解于蒸馏水中，加入15%氢氧化钠溶液2ml校正PH至7.2-7.4.加入琼脂,加热煮沸,使用权琼脂溶化.分装烧讧,121℃高压灭菌15分钟.
注:此培养基可供一般细菌培养之用,注平板或制成斜面.如用于菌落计数,琼脂量为1.5%;如作成平板或斜面,则应为2%.
⑵ 磷酸盐缓冲液:按GB/T4789.28-2003中3.22规定.
成分： 磷酸二氢钾 34克、1mol/l氢氧化钠溶液175ml、蒸馏水825ml 、PH7.2 制法: 先将磷酸盐溶解于500ml蒸馏水中,用1mol/l氢氧化钠溶液校正PH后,再用蒸馏水稀释至1000 ml.
稀释液: 取储存液1.25 ml ,用蒸馏水稀释至1000 ml,或每管10ml,121℃高压灭菌15分钟. ⑶ 明胶磷酸盐缓冲液
成分:明胶 2克、磷酸氢二钠 4克、蒸馏水 1000ml、PH6.2 制法:加热溶解,校正PH,121℃高压灭菌15分钟. ⑷ 0.85%灭菌生理盐水 ⑸ 75%乙醇 1.2 设备和材料 ⑴ 冰箱：0~4℃ ⑵ 恒温培养箱36℃±1℃ ⑶ 恒温水浴锅46±1℃ ⑷ 均质器或灭菌乳钵
⑸ 架盘药物天平：0~500克，精确至0.5克. ⑹ 菌落计数器. ⑺ 大镜4×
⑻ 灭菌吸管:1ml(具0.01ml刻度)、10ml(具0.1ml刻度)
⑼ 灭菌锥形瓶:500ml ⑽ 灭菌玻璃珠:直径约5mm ⑾ 灭菌培养皿直径约90mm ⑿ 灭菌试管16mm×160mm ⒀ 灭菌刀、剪子、镊子等。
1.3 检验程序（ 菌落总数的检验程序见图1）
检样做成几个适当倍数的稀释液选取择2个—3个适宜稀释度各取1ml分别加入灭菌培养皿内36±1度48±2h每皿内加入适量营养琼脂菌落计数报告
1.4 操作步骤 ⑴ 检样稀释及培养
a. 以无菌操作将检样25克(ml)剪碎放于含有225ml灭菌生理盐水或其他稀释液灭菌玻璃瓶内(瓶内预置适当数量的玻璃珠)或灭菌乳钵内，经充分振摇或研磨做成1：10的均匀稀释液。
固体检样在加入稀释液后，最好置均质器中以8000r/min～10000r/min的速度处理1min,做成1：10的均匀稀释液。
b. 用1ml的灭菌吸管吸取1：10的稀释液1ml，沿管壁徐徐注入含有9ml灭菌生理盐水或其他稀释液的试管内（注意吸管不要触及管内稀释液），振摇试管，混合均匀，做成1：100的稀释液。
c. 另取1ml灭菌吸管，按上条操作方法，做10倍递增稀释，如此每递增稀释一次，即换用1支1ml吸管。
d. 根据食品卫生标准要求或对标本污染情况的估计，，选择2～3个适宜稀释度，分别在做10倍递增稀释的同时，即以吸取该稀释度的吸管移1ml稀释液于灭菌培养皿内，每个稀释度做两个培养皿。
e. 吸稀释液移入培养皿后，应及时将凉至46℃营养琼脂培养基（可放置46±1℃水浴锅保温）注入培养皿约15ml 并转动培养皿使混合均匀。同时将营养琼脂培养基倾入加有1ml稀释液灭菌培养皿内作空白对照。
f. 待琼脂凝固后，翻转平板，置36±1℃温箱内培养48h±2h. ⑵ 菌落计数方法
做平板菌落计数时，可用肉眼观查，必要时用放大镜检查，以防遗漏。在记下各平板的菌数后，求出同稀释度的各平板平均菌落总数。 ⑶ 菌落计数的报告 a. 平板菌落数的选择
选取菌落数在30-300之间的平板作为菌落总数测定标准。一个稀释度使用两个平板，应采用两个平板平均数，其中一个平板有较大片状菌落生长时，则不宜采用，而应以无片状菌落生长的平板作为该稀释度的菌落数，若片状菌落不到平板的一半，而其余一半中菌落分布又很均匀，即可计算半个平板后乘2以代表全皿菌落数。平板内如有链状菌落生长时（菌落间无明显界线），若仅有一条链。可视为一个菌落；如果有不同来源的几条链，则应将每条链作为一个菌落计。 b. 稀释度的选择
1. 应选择平均菌落数在30-300之间的稀释度，乖以稀释倍数报告之（见表1中例1）。 2. 若有两个稀释度，其生长的菌落数均在30-300之间，则视两者之比如何来决定。若其比值小于或等于2，应报告其平均数，若大于2，则报告其中较小的数字，（见表1中例2及例3）。
3. 若所有稀释度的平均菌落数均大于300，则应按稀释度最高的平均菌落数乘以箕释倍数报告之（见表1中例4）。
4. 若所有稀释度的平均菌落数均小于30，则应按稀释找最低的平均菌落数乘以稀释倍数报告之（见表1中例5）。
5. 若所有稀释度均无菌落生长，则以小于1乘以最低稀释倍数报告之（见表1中例
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