(3)柱温的选择 柱温是一个重要的操作参数，直接影响分离效能和分析速度．在使最难分离的组分有尽可能好的分离前提下，采取适当低的柱温，但以保留时间适宜，峰形不拖尾为度。具体操作条件的选择应根据实际情况而定。
另外，柱温的选择还应考虑固定液的使用温度，柱温不能高于固定液的最高使用温度，否则固定派挥发流失，对分离不利。
(4)载体粒度及筛分范围的选择 载体的粒度愈小，填装愈均匀，柱效就愈高。但粒度也不能太小。否则，阻力压也急剧增大。一般粒度直径为柱内径的1／20～l／25为宜。在高压液相色谱中，可采用极细粒度，直径在μm数量级。
(5)固定液及其配比 分离气体及低沸点组分可采用10%～25％配比，其它组分采用5%～20％配比为宜。
(6)进样量的选择 在实际分析中最大允许进样量应控制在使半峰宽基本不变，而峰高与进样量成线性关系。一般说来，气体样品进样量为0.1～10 mL，液体样品进样量为0.1～10 ?L．
58、 在气液色谱中，色谱柱的使用上限温度取决于：A．样品中沸点最高组分的沸点
B．样品中各组分沸点的平均值 C固定液的沸点 D．固定液的最高使用温度
D 色谱柱的上限温度如果超过固定液的最高使用温度就会出现固定液流失、污染检测器，使基线不稳而无法工作。 59、 气相色谱测定样品中乙酸乙酯，丙酸甲酯，正丁酸甲酯的色谱数据见下表，死时间
为0.6min。 组分 保留时间tR(min) 峰面积 相对校正因子f'is 乙酸甲酯 2.72 18.1 0.60 丙酸甲酯 4.92 43.6 0.78 正丁酸甲酯 9.23 29.9 0.88 (1)计算每种组分的含量。(2) 根据碳数规律，预测正戊酸甲酯的保留时间。 （1）用归一化法计算各组分的含量 mi%=Aif'is/(A1f'is+…Aif'is+Anf'ns)×100
mi乙酸甲酯（%）=18.1×0.60/（18.1×0.60 + 43.6×0.78 + 29.9×0.88）×100 = 15.25 （2）∵碳数规律：lgt'R = A1n + C1
乙酸乙酯 n=3，lgt'R乙 = lg(tR-tm) = lg(2.72-0.6) = 0.326 丙酸甲酯n=4，lgt'R丙 = lg(tR-tm) = lg(4.92-0.6) = 0.635 正丁酸甲酯n=5，lgt'R丁 = lg(tR-tm) = lg(9.23-0.6) = 0.936 根据丙酸甲酯、正丁酸甲酯的数据 0.635 = 4A1 + C1 0.936 = 5A1 + C1
解方程的A1 = 0.301 C1=-0.596 ∵正戊酸甲酯有6个碳 ∴ n = 6 ∴lgt'R戊 = 6×0.301 - 0.569 = 1.237
t'R戊=17.26 tR = t'R + tm = 17.26 + 0.6 = 17.86(min)
60、
分别精密称取维生素E标准品和供试样品各0.1998g和 0.2011g，置棕色具塞锥形
瓶中，分别精密加入1.0mg/ml正三十二烷的正己烷溶液10ml，密塞，振摇使溶解，分别取1ul注入GC仪。测得对照品瓶中正三十二烷和维生素E峰面积为797469和297456μvs；测得供试品瓶中正三十二烷和维生素E的峰面积为805741和296513μvs。计算本品维生素E含量。 解1：（公式4分；其他步骤各2分。）
mi
Wi?fi?AifiAiF??i/smi/ms=F*Ai/As mSfS先求F= (0.1998/292456)/10/797469)=0.053566 AS再求mi= ms* F*Ai/As=10*0.053566*296513/805741=0.1972mg 组分％＝mi/ W样＝0.1972/0.2011＝98.0％ 解2：（公式4分；其他步骤各2分。）
A对A样K2m对?稀释度 ?K1?K2组分%???100aKW?稀释度内内1样
K1=297456/797469=0.3730； K2=296513/805741=0.3680 m对＝0.1998mg；W样＝0.2011mg
组分％＝(0.3680/0.3730)*(0.1988/0.2011)*100%=98.0％
HPLC 61、 高效液相色谱是如何实现高效、快速、灵敏的？ 气相色谱理论和技术上的成就为液相色谱的发展创造条件，从它的高效、高速和高灵敏度得到启发，采用5-10μm微粒固定相以提高柱效，采用高压泵加快液体流动相的流速；设计高灵敏度、死体积小的紫外、荧光等检测器，提高检测灵敏度，克服经典液相色谱的缺点，从而达到高效、快速、灵敏
62、 简述液相色谱中引起色谱峰扩展的主要因素，如何减少谱带扩张，提高柱效？ 液相色谱中引起色谱峰扩展的主要因素为涡流扩散、流动相传质、停留流动相传质及柱外效应。在液相色谱中要减少谱带扩张，提高柱效，要减少填料颗粒直径，减小填料孔穴深度，提高装填的均匀性，采用低黏度溶剂作流动相，流速尽可能低，同时要尽可能采用死体积较小的进样器、检测器、接头和传输管线等
63、 流动相为什么要脱气？常用的脱气方法有拿几种？ 流动相中溶解气体存在以下几个方面的害处
（1）气泡进入检测器，引起光吸收或电信号的变化，基线突然跳动，干扰检测； （2）溶解在溶剂中的气体进入色谱柱时，可能与流动相或固定相发生化学反应；
（3）溶解气体还会引起某些样品的氧化降解，对分离和分析结果带来误差。因此，使用前必须进行脱气处理。
常用的脱气法有以下几种： （1）加热脱气法；（2）抽吸脱气法（3）吹氦脱气法；（4）超声波振荡脱气法。
64、 如何根据试样选择HPLC的分离类型。
挥发性：挥发性高，采用GC；难挥发，采用HPLC。
分子量：大于2000，凝胶色谱；小于2000，其他色谱。小于200， GC。
溶解度：溶于非极性溶剂，吸附或正相色谱；溶于水相，反相色谱。
离解否：酸碱离子型，离子、离子对、离子交换色谱；中性非离子，反相键合相色谱；离子和非离子：反相离子对色谱。
结构性：同系物，吸附、键合相色谱；同分异构体：硅胶吸附色谱；对映异构体：手性柱；生物大分子：凝胶或亲和色谱。 65、 HPLC流动相选择原则，什么是梯度洗脱?
选择合适的极性（溶剂强度）来获得合适的保留和分离。常采用二元或多元组合（底剂+洗脱剂）溶剂系统。
梯度洗脱就是随洗脱时间按一定程序连续改变载液中两种或多种不同极性溶剂的配比，通过载液的极性、溶剂强度或离子强度、pH值的变化来改善分离效果。 66、 某人用凝胶色谱分离一高聚物样品，分离情况差，他说改变流动相组成，分离情况
可以大为改善，这种说法对吗？为什么？ 不对。凝胶色谱中流动相只起运载作用，不能依靠改变其性质和组成来改善色谱体系的选择性，凝胶色谱的选择性只能通过选择合适的固定相，根据固定相孔隙大小以及孔径分布范围的最佳化来实现。
67、 在液相色谱中。常用作固定相，又可用作键合相基体的物质是
A. 分子筛 B. 硅胶 C. 氧化铝 D. 活性炭
B：要形成化学键合固定相，所用的基质材料应有某种化学反应活性，在四种固体固定相中只有硅胶含有硅醇基，是能进行键合的活性官能团。 68、 在150×Φ2mm硅胶柱流动相为己烷/甲醇（150:2），紫外检测器色谱条件下分离丙
烯酰胺，判断以下组分的出峰次序，为什么？
A
B
在给定的色谱条件下，组分B先出峰，组分A后出峰。以硅胶为固定相，己烷/甲醇（150:2）为流动相，该体系为正相色谱，样品的极性A>B，在正相色谱体系极性小的组分先出峰，极性大的组分后出峰，所以出峰次序为B先出，A后出。 69、 在硅胶柱上，用甲苯为流动相，某组分的保留时间为30min，如果改用四氯化碳或
乙醚为流动相，试指出选用哪中溶剂能减少该组分的保留时间？为什么？
该体系为正向色谱体系。在该体系中流动相的极性增大保留值减少。流动相甲苯、四氯化碳及乙醚的溶剂强度参数分别是0.29、0.18、0.38，因此选用溶剂强度参数大于甲苯的乙醚，可缩短该化合物的保留时间。
70、 为了测定邻氨基苯酚中微量杂质苯胺，现有下列固定相：硅胶，ODS键合相，流
动相有。水-甲醇，异丙醚-己烷，应选用哪种固定相，流动相？为什么？
邻氨基苯酚中微量杂质苯胺测定，为了良好分离，应让苯胺先出峰，由于苯胺的极性小于邻氨基苯酚，因此应采用正相色谱法，选用硅胶为固定相，异丙醚-己烷为流动相。 71、 在ODS键合相固定相，甲醇-水为流动相时试判断四种苯并二氮杂苯的出现峰顺
序。为什么？
1. 2. 3. 4.
色谱条件为反相键合相色谱体系，在反相色谱体系中极性大的组分k小，首先出峰，按四种苯并二氮杂苯的结构，出峰顺序为4-3-2-1。 72、 指出下列各种色谱法，最适宜分离什么物质？
（1）气液色谱 （2）正相色谱 （3）反相色谱（4）离子交换色谱 （5）凝胶色谱 （6）气固色谱 （7）液固色谱 答：（1）气液色谱――分离易挥发、受热稳定的物质 （2）正相色谱――分离极性亲水性化合物 （3）反相色谱――分离疏水性化合物 （4）离子交换色谱――离子型化合物
（5）凝胶色谱――分离相对分子量高的化合物，常用于鉴定聚合物 （6）气固色谱――分离气体烃类、永久性气体 （7）液固色谱――极性不同的化合物、异构体
73、
在HPLC分析中为了检测低聚糖在总糖中的含量，宜用（ ）检测器 A：紫外吸收 B：荧光 C：.示差折光 D：电化学 74、 下面（ ）是HPLC仪的重要部件
1.往复泵 2.撞（冲）击球 3.气化室 4.分流装置
仪器分析总习题及参考答案精讲
