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橡胶树白粉病菌分子检测技术的建立
作者：毛宇宁 梁鹏 刘文波 林春花 缪卫国 郑服丛 来源：《植物保护》2016年第04期
摘要 根据橡胶树白粉菌（Oidium heveae Steinm.）基因组中的特有保守序列OHS，设计两对特异性引物OHF1/OHR1和OHF2/OHR2。以不同地区收集的6份O. heveae（OH1～OH6）和橡胶树胶孢炭疽病菌（Colletotrichum gloeosporioides Penz.）等5种非靶标病原菌及健康橡胶树叶片基因组DNA为模板，建立了橡胶树白粉菌PCR及nestedPCR分子检测技术，并验证了检测体系的特异性和灵敏度。结果表明，引物OHF1/OHR1和OHF2/OHR2对橡胶树白粉菌均具有较高的特异性和灵敏度。其中引物OHF2/OHR2能检测到10 pg/μL的橡胶树白粉菌DNA，而以OHF1/OHR1和OHF2/OHR2组合进行nestedPCR，其最低DNA检测浓度达到0.01 fg/μL。人工接种试验中，当孢子接种量为2×103个/叶时，PCR和nestedPCR检测体系可分别在接种4 d和24 h后检测到目的条带。表明nestedPCR对在叶片组织中处于潜育期的橡胶树白粉菌的检测更有效，可为橡胶树白粉菌的检测提供一种简便而准确的检测方法。 关键词 橡胶树白粉病菌； 潜育期； 分子检测 中图分类号： S 763.1 文献标识码： A
橡胶树白粉病是由专性寄生的橡胶树粉孢属真菌Oidium heveae Steinm.引起的气传性病害[1]。该病在适宜条件下具有发病快、危害重的特点。病菌主要危害橡胶树的嫩叶、嫩芽、嫩梢和花序。严重感病的叶片会出现畸形、皱缩、变黄甚至脱落[23]。早春时病菌还可能造成第二次落叶，使干胶产量明显减少，带来重大的经济损失[4]。橡胶树白粉菌的潜育期一般为5 d左右，期间病原菌已侵入橡胶树组织但大多数处于潜伏状态，因而植株不表现症状，这直接影响到对病害的准确估计和预测[59]。
目前，橡胶树白粉菌的鉴定主要是依据其引起症状、病菌形态和生理生化反应来完成[1011]。在发病前或初期快速、准确地对病菌进行检测，对及时采取有效的防治措施，控制病害在胶林的扩散、减少经济损失具有十分重要的意义。关于橡胶树白粉病菌的分子检测技术报道甚少，根据真菌通用引物ITSl/ITS4可扩增出ITSI和ITS2及5.8S rDNA全序列[12]，但不能通过扩增结果将橡胶树白粉菌与其他参比菌及健康橡胶树区分开，需经过进一步测序比对才能确定。
本研究团队前期完成了橡胶树白粉病菌全基因组测序，经比对分析找到一条橡胶树白粉菌特有的特异性保守序列OHS（专利申请号：201510577343.9）。本文根据该序列设计特异引物，建立橡胶树白粉菌PCR及nestedPCR分子检测技术，旨在开发出针对橡胶树叶片组织中
橡胶树白粉病菌分子检测技术的建立
