纯化水需氧菌检查R2A培养基适用性试验方案
起草 部门：QC组 部门：QC组 审核 部门：质量部 批准 质量部 颁发
下表用于记录修订/变更主要内容及历史。 文件编号
修订原因 按GMP（2010年修订版）及2015年版《中国药典》要求新制定 修订日期 01 质量部 质量负责人 签名： 签名： 日期： 日期： 本文件根据需要应分发于以下部门：签名： 签名： 日期： 日期： 1 / 10
目 录
1. 概述
2. 验证目的和范围 3. 组织及职责 4. 验证进度计划表
5. 验证所需要的仪器设备的确认
6. 验证所需要的菌种、培养基、试剂、检验样品的确认 7.验证项目和验证方法 7.1试验菌株 7.2菌液制备 7.3培养基适用性检查
7.4计数方法适用性试验（薄膜过滤法）8.偏差与漏项控制 9.验证报告会审
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1. 概述
我公司自制纯化水微生物限度检查项目为需氧菌总数检查。参照《中国药典》2015版四部附录1105：微生物计数法的规定，须对纯化水检查所用的R2A培养基进行适用性试验。通过适用性试验以确认所采用的培养基适用于纯化水的需氧菌检查。
本验证方案通过试验菌株的回收率测试，验证R2A琼脂培养基是否适用于本品的需氧菌总数检查。
2. 验证目的和范围
验证纯化水的需氧菌检查所用R2A培养基的适用性，对其有效性进行评价，保证检验结果的可靠性。本验证方案采用1批按GMP要求组织生产的纯化水，并进行R2A培养基适用性检查。 3.组织及职责
3.1验证方案和验证报告的起草、审核、批准
验证方案由质量部QC组负责起草，由质量部审核，最终由质量负责人批准。验证方案实施完成后，由QC组负责汇总需氧菌检查法验证的结果、撰写报告，由质量部审核，最终由质量负责人批准报告。 3.2验证方案的培训
验证方案在经质量负责人批准后，由QC组组长对本次验证实施的相关人员组织培训工作，并将该次的培训记录归档。
3.3验证方案实施过程中的变更和偏差
验证方案实施过程中如有变更和偏差，质量负责人应当组织进行评估并采取相应的控制措施。 3.4 验证工作小组成员表
姓名 4. 验证进度计划表
本次R2A培养基的适用性试验的计划安排时间是2015年8 月至2015年 9月。 5. 验证所需要的仪器设备的确认 主要检验仪器设备确认表 序号 1 2 仪器设备名称电子天平 电热恒温水浴锅 型 号 编号 生产厂家 部门及职务 质量负责人/质量受权人 质量部QA组长 质量部QC组长 质量部QC 职 责 负责验证方案及报告的批准 审核验证方案、审核验证报告并协调工作负责验证方案审核、实施、汇总报告及培训工 作 负责验证方案起草、具体实施、报告工作3 / 10
3 4 5 6 7 恒温培养箱 压力蒸汽灭菌锅 生物安全柜 微生物限度检查仪 洁净工作台 检查人/日期： 复核人/日期： 6. 验证所需要的菌种、培养基、试剂、检验样品的确认 6.1.试验菌种检查表
序号 菌种名称 铜绿假单胞菌 枯草芽孢杆菌 代码 CMCC（B）10104 CMCC（B）63501 甘油菌种批号 菌种内控 缩写 Pa Bs 来源 1 2 中国食品药品检定研究院 中国食品药品检定研究院 检查人/日期： 复核人/日期： 6.2试验所需的培养基检查
序号 01 02 03 04 名称 胰酪大豆胨液体培养基 胰酪大豆胨琼脂培养基 R2A琼脂培养基 R2A琼脂对照培养基 生产厂家 是否通过培养基适用性试验 □是 □否 □是 □否 □是 □否 □是 □否 批号 检查人/日期： 复核人/日期： 6.3试剂
序号 01 名称 pH 7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液干粉 规格 250g 级别 \\ 生产厂家 批号 检查人/日期： 复核人/日期： 6.4.试剂及培养基配制
pH7.0氯化钠－蛋白胨缓冲液（冲洗液）：称取pH 7.0氯化钠-蛋白胨缓冲液干粉16.09g。加水定容1000mL，微温溶解，滤清，分装至蓝盖试剂瓶，121℃湿热灭菌20min。
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胰酪大豆胨液体培养基：取胰酪大豆胨液体培养基29.8g，加1L纯化水，加热助溶，分装至蓝盖试剂瓶，121℃湿热灭菌20min。
胰酪大豆胨琼脂培养基：取本品40g，加1L纯化水，加热助溶，分装至锥形瓶，121℃湿热灭菌20min。
R2A琼脂对照培养基：取本品 4.55g，加300 mL纯化水，加热助溶，分装至锥形瓶，121℃
湿热灭菌20min。
R2A琼脂培养基：取本品18.2g，加1L纯化水，加热助溶，分装至蓝盖试剂瓶，121℃湿热灭菌20min。
7.验证项目和验证方法 7.1试验菌种
R2A培养基的适用性试验所用的菌株为本实验室-80℃冰箱保存的铜绿假单胞菌、枯草芽孢杆菌的甘油菌，均为第2代。 7.2菌液制备 7.2.1.稀释液的配制
pH 7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液：称取pH 7.0氯化钠-蛋白胨缓冲液干粉16.09g。加纯化水定容1000mL；微温溶解，滤清，分装至1000 mL蓝盖试剂瓶中，121℃湿热灭菌20min。 7.2.2.菌液的制备
从-80℃冰箱取出铜绿假单胞菌、枯草芽孢杆菌的第2代菌液，分别接种至10ml胰酪大豆胨液体培养基中，30～35℃培养18～24小时。同时分别划线接种至胰酪大豆胨琼脂培养基中，30～35℃培养18～24小时。
菌液制备后若在室温下放置，应在2 小时内使用；若保存在2～8℃，可在24小时内使用。黑曲霉孢子悬液可保存在2～8℃，在验证过的贮存期内使用。 7.3.培养基适用性检查
取铜绿假单胞菌、枯草芽孢杆菌各不大于100 cfu的菌液1ml分别注入90mm无菌平皿中，注入15-20ml温度不超过45℃的供试R2A琼脂培养基，混匀，凝固，每种试验菌各稀释度制备两个平板，置30-35℃倒置培养3天，计数；同时，用R2A琼脂对照培养基替代被检R2A琼脂培养基进行上述试验。
回收率=供试培养基组/对照培养组X100%
计数培养基适用性检查验证记录
试验时间 年 月 日 完成时间 年 月 日
供试培养基组 验证菌株 平皿号 cfu∕ml 对照培养基组 cfu∕ml 回收率% 应50%~200% -- -- 1 铜绿假单胞菌 (培养3天计数) 平均值 2 5 / 10
纯化水需氧菌检查R2A培养基适用性试验方案版药典上上
