IL-22对类风湿关节炎成纤维样滑膜细胞的作用*
刘 梦， 刘 岩， 杨梦如， 莫碧瑶， 潘云峰△
【摘 要】［摘 要］目的:探究白细胞介素(IL)-22对类风湿关节炎(RA)成纤维样滑膜细胞(FLSs)功能的影响及机制。方法:组织块法培养RA-FLSs。将不同浓度(0、1、10、100 μg/L)的重组人源性IL-22(rhIL-22)与RA-FLSs共培养24 h、48 h、72 h，CCK-8法检测细胞活力的改变;利用10 μg/L的rhIL-22作用于RA-FLSs 24 h，流式细胞术检测细胞周期改变。rhIL-22和/或信号转导和转录因子3(STAT3)特异性抑制剂STA-21以不同浓度作用RA-FLSs 24 h，Western blot法检测Bcl-2和p-STAT3蛋白水平的变化。结果:不同浓度的rhIL-22作用于RA-FLSs 24 h、48 h、72 h后，RA-FLSs细胞活力明显增高，均显著高于对照组(P＜0.05)。rhIL-22刺激RA-FLSs后，S期和G2/M期细胞明显增多，G0/G1期细胞减少。Western blot法检测结果提示rhIL-22可上调RA-FLSs中Bcl-2、p-STAT3的蛋白水平，而STA-21单用或联用rhIL-22均可抑制RA-FLSs中Bcl-2及p-STAT3的表达(P＜0.05)。结论:IL-22在RA-FLSs细胞活力和周期调节中起重要作用，且STAT3在IL-22促RA-FLSs细胞Bcl-2表达的过程中起关键作用，提示IL-22可能对RA-FLSs凋亡有一定的影响。
【期刊名称】中国病理生理杂志 【年(卷),期】2016(032)007 【总页数】6
【关键词】［关键词］类风湿关节炎;成纤维样滑膜细胞;白细胞介素-22;信号转导和转录因子3;Bcl-2
白细胞介素(interleukin，IL)-22是IL-10细胞因子超家族成员，与异二聚体受体结合后可激活细胞内信号转导和转录因子1/3/5(signal transducers and activators of transcription 1/3/5，STAT1/3/5)、细胞核因子κB(nuclear factor kappa B，NF-κB)、丝裂原活化蛋白激酶(mitogen-activated protein kinase，MAPK)和磷脂酰肌醇3激酶/蛋白激酶B/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(phosphatidylinositide 3-kinase-Akt-mammalian target of rapamycin，PI3K/Akt/mTOR)等信号通路，诱导多种基因尤其是STAT3下游的基因表达［1］。由于STAT3与肿瘤密切相关［2］，因此IL-22/IL-22R1在肿瘤领域受到了极大的关注。研究表明IL-22在多种癌细胞中［3-6］通过激活STAT3上调其下游抗凋亡基因(bcl-2、bcl-xL)的表达，抑制癌细胞凋亡，从而促进癌症的进展，IL-22/STAT3被看作一个有效的作用靶点。
类风湿关节炎(rheumatoid arthritis，RA)是最常见的肌肉骨骼系统的炎症性疾病，在我国的发生率约为1%，病因未明。成纤维样滑膜细胞(fibroblastslike synoviocytes，FLSs)在RA疾病起始和进展过程中起着关键作用，可分泌各种炎症因子，同时也是许多炎症因子的靶细胞，其细胞特性发生了根本性改变，称为“持续活化的细胞”［7］。本课题组前期研究证实 Wnt/β-catenin通路、NF-κB通路、PI3K/Akt/ mTOR通路均与RA-FLSs的生物活性相关(如细胞增殖、迁移、侵袭等)［8-10］，且有研究表明IL-22可激活RA-FLSs内多条信号通路，如JAK/STAT3、MAPK、PI3K/Akt/mTOR［11-13］等。结合IL-22在癌细胞中的作用及RA-FLSs“类肿瘤样细胞”特性，本实验旨在探讨IL-22对RA-FLSs细胞活性、细胞周期及细胞凋亡的影响，并进一步研究其可能的作用机制。
材料和方法
1 标本采集
滑膜组织来自2015年1月～2015年9月中山大学附属第三医院行膝关节置换术或关节镜下滑膜清理术的患者。其中，类风湿关节炎7例(女性6 名)，年龄32～81岁，平均年龄(52.0±7.2)岁。所有RA患者的诊断均符合1987年美国风湿病学会类风湿关节炎诊断标准，排除感染、肿瘤及其它类型的结缔组织病等相关疾病。 2 主要仪器和试剂
酶标仪(Thermo);流式细胞仪(BD FACS Calibur);化学发光成像系统(TANON 5200);胎牛血清(fetal bovine serum，FBS)、高糖DMEM无血清培养基(Gibco);抗CD55-FITC抗体、mouse IgG1-FITC抗体(BD);rhIL-22(R＆D);CCK-8试剂盒(Dojindo); STA-21(Santa Cruz);兔抗人Bcl-2抗体、兔抗人p-STAT3抗体、兔抗人STAT3抗体、兔抗人β-actin抗体(Cell Signaling Technology);HRP标记羊抗兔II抗(北京博奥森);细胞周期检测试剂盒、全蛋白提取试剂盒、BCA蛋白含量检测试剂盒和加强型ECL检测试剂盒(南京凯基)。 3 方法
3.1 细胞的培养与鉴定 组织块法培养细胞，经消化传代后获得较纯的成纤维样滑膜细胞，使用生长状态较好的第3～5代细胞。光学相差显微镜下观察细胞生长形态，流式细胞术检测CD55+细胞率。
3.2 CCK-8法检测rhIL-22作用于RA-FLSs后细胞活力的变化 将RA-FLSs以2.5×107/L的密度接种于96孔板，每孔100 μL。实验分5组:空白组，即不含细胞培养液组;对照组，即正常培养的RAFLSs;1、10、100 μg/L rhIL-22组，
IL-22对类风湿关节炎成纤维样滑膜细胞的作用
