欧阳历创编 2021..02.09
免疫组化实验结果的判定和分析
时间：2021.02.09 创作人：欧阳历
免疫组化实验结果的判定和分析
就实验结果而言，免疫组化技术服务主要涉及抗体实验结果的描述与分析、图片的确定与选取、相关数据的提供，上述工作是免疫组化工作的重点内容。只有严格的实验设计、标准的实验操作、专业化的结果分析才能满足客户的要求，更好地为客户提供最优质的服务。 免疫组化结果的判定原则：
⒈必须同时设对照染色。没有对照染色的免疫组化染色结果是不可信的。
⒉抗原表达必须在特定部位。如LCA应定位在细胞膜上；CK应定位在细胞浆内；PCNA及p53蛋白应定位在细胞核内；EMA应定位在细胞膜上等等。不在抗原所在部位的阳性着色，一概不能视为阳性。
⒊阴性结果不能视为抗原不表达。由于检测方法灵敏度有高低之分，有时可因染色方法灵敏度不够，而导致阴性反
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应，判断时应注意。
⒋尽量避开出血、坏死及切片刀痕和界面边缘细胞的阳性表达，特别是酶免疫标记。因为这类阳性着色多系内源干扰，或系人为因素所致。
⒌对免疫组化标记结果的意义不能绝对化，应结合临床资料、X线等影像学及实验结果综合分析。 对照染色设计： (一）对照染色的目的
设对照的目的是为了排除假阴性和假阳性。假阴性的原因主要有三种：
① 组织处理不当，抗原丢失过多或被遮蔽；
② 抗体失活、效价过低或稀释度不合适（主要指一抗，即特异性抗体）；
③ 染色步骤遗漏及差错，或显色剂的选择、缓冲液pH和离子强度不当等。
假阳性均系由多种因素造成的非特异着色所致，原因主要有：
① 自发荧光或内源酶等干扰； ② 抗体试剂不纯(特别是一抗）；
③ 操作失误，如污染、切片干枯或显色剂操作不当等； ④ Fc受体的干扰，等等。 （二）对照的种类及其选用目的
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对照染色大致可分为四类：即阳性组织对照、阴性组织和阴性试剂对照及自身对照。 ⒈阳性组织对照
指用已证实含有靶抗原的同源及不同源组织切片或细胞涂片与待检实验切片同时作同样处理和免疫染色的组织对照。正确的结果应呈现阳性，目的是为了证实所用免疫组化染色流程的有效性，排除假阴性的可能。 ⒉阴性组织对照
指用已证实不含靶抗原的同步处理和免疫标记染色的组织对照。正确的结果应为阴性，目的是除外假阳性。 ⒊阴性试剂对照
是指用于证实在免疫组化染色中所用试剂，尤其是特异性抗体试剂的有效性和可靠性而所设立的同步免疫染色对照，包括有：空白对照、替代对照、吸收试验和抑制试验等。目的在于除外假阳性和证实所用免疫组化试剂及其技术方法的有效性和待检实验切片免疫标记阳性结果的可靠性。
⑴ 空白对照
指以缓冲液（PBS、TBS等）取代第一抗体（主要的，必要时还可做第二抗体及桥联抗体的空白取代），其他各步不变的试剂对照染色，结果应为阴性。 ⑵ 取代对照
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免疫组化实验结果的判定和分析之欧阳历创编
