丹参酮ⅡA对大鼠脑缺血再灌注损伤的作用及机制研究
刘月秋 刘 辉△
【摘 要】【摘要】目的探索丹参酮ⅡA对大鼠脑缺血再灌注损伤的作用及机制。方法 30只SD大鼠随机分为假手术组、脑缺血再灌注损伤组和丹参酮ⅡA组，每组10只。采用线栓法构建大鼠大及至中动脉局灶所血再灌注损伤模型。术后2 h拔除栓线，制备缺血2 h再灌注损伤模型。假手术组仅分离颈总动脉，不夹闭。丹参酮ⅡA组在术前15 min腹腔注射丹参酮ⅡA剂量（1 mL/kg），脑所血再灌注损伤组和假手术组术前15 min腹腔注射等量0.9%氯化钠注射液，术后24 h断头处死动物，观察大鼠脑组织病理形态学改变以及肿瘤坏死因子α（TNF-α）、白介素-1β（IL-1β）、白介素-6（IL-6）、Wnt、β-catenin、cyclin D1、survivin、p53、Bax和BCL-2的表达，评价丹参酮ⅡA对大鼠脑缺血再灌注损伤的作用。结果与假手术组相比较，脑缺血再灌注损伤组脑组织损伤评分明显升高 （P＜0.05），Wnt、β-catenin、cyclin D1、survivin、p53以及Bax的mRNA和蛋白水平上升（P＜0.05），BCL-2的mRNA和蛋白水平下降 （P＜0.05），TNF-α、IL-1β和IL-6的mRNA表达和血清水平上升（P＜0.05）；与脑缺血再灌注损伤组相比较，丹参酮ⅡA组上述指标均显著改善（P＜0.05）。结论丹参酮ⅡA可减轻脑缺血再灌注损伤，其机制可能与其可抑制Wnt/β-catenin/p53信号途径介导的炎症和凋亡相关。 【期刊名称】中国中医急症 【年(卷),期】2016(025)012 【总页数】4
【关键词】【关键词】丹参酮ⅡA 大鼠 脑缺血再灌注损伤 炎症 凋亡 Wnt/β-
catenin/p53
【文献来源】https://www.zhangqiaokeyan.com/academic-journal-cn_journal-emergency-traditional-chinese-medicine_thesis/0201219899932.html
·实验报告·
脑缺血再灌注损伤是脑供血中断后，重新恢复脑血供导致脑损伤反而加重的临床危相，是导致人类致死和致残的重要原因，仅次于心脏疾病和癌症。因此减轻脑缺血再灌注损伤对临床具有重要的现实意义［1-2］。丹参酮ⅡA是传统中药丹参的一种成分，研究发现其具有抗凋亡，抗炎，抗肿瘤等生物学活性［3-4］，而凋亡和炎症是导致脑缺血再灌注损伤重要原因［5-6］。因此本实验以大鼠为研究对象，探讨丹参酮ⅡA对脑缺血再灌注损伤的作用及机制。现报告如下。
1 材料与方法
1.1 动物及试剂 雄性SD大鼠30只，体质量（220± 20）g，由武汉大学实验动物中心提供（合格证号SCXK鄂2014-0007）。均提前2周购入，放置在SPF级动物饲养室内喂养。丹参酮ⅡA磺酸钠（上海第一生化药业有限公司，国药准字Z20026249），质量分数为98%；白介素-6（IL-6），肿瘤坏死因子-α（TNF-α）、白介素-8（IL-8）ELISA检测盒 （Ebioscience，USA），β-actin（abgent，USA），BCL-2、Bax、Wnt、β-catenin、cyclin D1、survivin以及p53（CST，USA）。
1.2 分组与造模 30只SD大鼠随机分为假手术组（Sham），脑缺血再灌注损伤组（IRI）和丹参酮ⅡA组（TSN），每组10只。参照Liu GD等［7］方法，采用线栓法构建大鼠大脑中动脉局灶缺血再灌注损伤模型，术后2 h拔除栓线，
制备缺血2 h再灌注损伤模型。假手术组仅分离颈总动脉，不夹闭。丹参酮ⅡA组在术前15 min腹腔注射丹参酮ⅡA剂量（1 mL/kg），脑缺血再灌注损伤组和假手术组术前15 min腹腔注射等量0.9%氯化钠注射液，术后24 h断头处死动物。
1.3 观察项目 1）脑组织病理组织学检查。脑组织置于4%多聚甲醛液4℃后固定1周。依次脱水、透明、浸蜡及包埋，行厚8 μm冠状切片、常规HE染色、封片，光镜下观察，损伤评分参考文献［6］。2）RT-PCR检测。RT-PCR法检测各组脑组织Wnt，β-catenin，cyclin D1，survivin，p53，Bax，BCL-2，IL-6，TNF-α和IL-8的表达水平，具体方法参考文献［7］。3）ELISA检测。按照ELISA试剂盒说明书操作步骤检测血清中IL-6，TNF-α和IL-8表达水平。4）Western blotting检测脑组织Wnt，β-catenin，cyclin D1，survivin，p53，Bax 以 及BCL-2等蛋白水平的表达。取各组脑组织50 mg，采用westernbloting方法检测脑组织Wnt，β-catenin，cyclin D1，survivin，p53，Bax以及BCL-2的表达，具体步骤参考文献［7］。
1.4 统计学处理 应用SPSS18.0统计软件分析。计量资料以（s）表示，计数资料采用χ2检验。P＜0.05为差异有统计学意义。
2 结 果
2.1 各组脑组织病理改变的比较 见图1，表2。与Sham组相比，IRI组神经元细胞损伤，固缩核和神经元染色明显增加（P＜0.05），而TSN组神经元细胞损伤，固缩核和神经元染色明显降低（P＜0.05），提示TSN预处理可明显脑缺血再灌注损伤导致的脑损害。
2.2 各组脑组织Wnt/β-catenin/p53信号通路关键因子表达的比较 见图2，表
丹参酮ⅡA对大鼠脑缺血再灌注损伤的作用及机制研究
