2011至2012年徐汇区致泻性大肠埃希菌病原学监测与流
行病学研究
赵雪涛，高 昆，张春华
【摘 要】摘要:目的 监测致泻性大肠埃希菌(DEC)在肠道传染病中的感染情况，掌握区域内各种DEC的分子流行病学特征。方法 通过采集医院肠道监测点的胃肠道感染病例进行持续性的病原学监测，使用设计的10对不同毒力基因的引物探针片段进行检测后，分析各类DEC的流行病学分布特征。结果 各类DEC的阳性检出率为9%[包括侵袭性大肠埃希菌(EIEC)、致病性大肠埃希菌(EPEC)、产毒性大肠埃希菌(ETEC)、肠出血性大肠埃希菌(EHEC)]，如增加检测聚集性大肠埃希菌(EAEC)，阳性率上升至12%;包含EAEC和弥散性聚集大肠埃希菌(DAEC)时，阳性率为17%;包含EAEC、耐热性肠毒素阳性时，阳性率为23%。EAEC和DAEC有明显的年龄分布特征，ETEC和DAEC的季节性特征相反，各类DEC均无性别分布差异。结论 各类DEC的感染者年龄分布特点明显，月度分布呈季节性变化，加强并建立长期持续性的DEC监测是深入了解DEC分子流行病学的基础。 【期刊名称】检验医学 【年(卷),期】2013(028)008 【总页数】5
【关键词】关键词:致泻性大肠埃希菌;病原学监测;分子流行病学
致泻性大肠埃希菌(diagrrheagenic Escherichia coli，DEC)包括致病性大肠埃希菌(entreopathogenic Escherichia coli，EPEC)、产毒性大肠埃希菌(enterotoxigenic Escherichia coli，ETEC)、侵袭性大肠埃希菌
(enteroinvasive Escherichia coli，EIEC)、肠出血性大肠埃希菌(enterohoemorrhagic Escherichia coli，EHEC)和聚集性大肠埃希菌(entroaggregative Escherichia coli，EAEC)，是重要的引起腹泻的病原性细菌。近年来国内外的报道还有弥散性聚集大肠埃希菌(dissfuely adheret Escherichia coli，DAEC)、产非洲绿猴肾细胞(Vero)毒素大肠埃希菌[1]。因其致病基因多种多样，病理过程各异，且目前我国大多数的临床微生物实验室针对肠道病原菌的分子检测较不普及，依然沿用传统的分离培养方法，故检出率较低，对于病原菌本身了解不多，对于DEC的流行病学特征了解较为缺乏。本次研究监测2011年6月至2012年5月的徐汇区某医院肠道门诊病例，按照上海市肠道传染病监测方案的要求规范采样，进行DEC的持续监测，以求了解和掌握本区域内DEC的病原学特点和流行病学特征。
材料和方法
一、标本与病例选择
来自于2011年6月至2012年5月的徐汇区某医院肠道门诊病例，按照上海市肠道传染病监测方案的要求规范采样，采样于运送培养基(carrierblair培养基)，24 h内送至实验室初次分离接种。 二、方法
1.细菌接种分离培养 标本直接于SS培养基划线分离，37℃培养20 h后挑取形态为粉红色、发酵乳糖的单个菌落，纯分离接种营养琼脂斜面和LB肉汤培养基，37℃培养8 h后备用。营养琼脂的纯分离用于进行生化反应鉴定。 2.革兰染色 使用珠海贝索的革兰染液。
3.大肠埃希菌属的生化鉴定 使用VITEK COMPACT全自动细菌鉴定仪和革兰阴
性菌鉴定卡(GN)鉴定。
4.细菌核酸提取 使用煮沸法。挑取单个欲测试菌落，在含 0.1%Triton X-100、0.5 mmol/L乙二胺四乙酸(elhylene diamine tetraacetic acide，EDTA)的100 μL配制溶液的离心管中悬浮，放入100℃金属浴中5 min，然后用微量离心机于室温以12000×g离心5 min，取上清即可用于聚合酶链反应(polymerase chain reaction，PCR)检测。
5.PCR反应体系 镁离子浓度为5 mmol/L，上下游引物浓度各为250 nmol/L，探针浓度为150 nmol/L，DNTP 浓度为 0.2 mmol/L，Taq 酶为2 IU，模板 3 μL，用 ddH2 O 补足总体积为 30 μL。
6.PCR反应条件 37℃ 2 min，94℃ 3 min;94℃ 10 s，60℃ 40 s，40个循环;在60℃时检测荧光值。
7.DEC各毒力基因引物和探针序列 以premier公司的beacon designer 7.90版本的软件直接获取基因编号序列，用软件选取上下游引物和taqman探针。见表1。
8.仪器与试剂 Biorad IQ5荧光定量PCR仪，PCR用引物、探针及 DNTP等试剂均由上海赛百盛生物技术有限公司合成，选用的培养基均来源于上海市疾病预防控制中心培养基室，且所有试剂耗材均在有效期内使用。 三、统计学方法
采用Stata 7.0统计软件进行 χ2检验，P＜0.05为差异有统计学意义。
结 果
一、整体阳性率和各类DEC的阳性率
2011年6月至2012年5月共检测标本834例，其中 EPEC(Eae+和/或
2011至2012年徐汇区致泻性大肠埃希菌病原学监测与流行病学研究
