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番茄黄化曲叶病毒Rep基因植物表达载体的构建及对番茄的遗传转化
作者：裴华丽 刘永光 乔宁 李美芹 薛其勤 杨天慧 来源：《江苏农业科学》2015年第02期
摘要：克隆番茄黄化曲叶病毒的复制酶基因（TYLCV-Rep），并构建其植物表达载体，通过农杆菌介导法转入番茄子叶外植体。经过共培养、潮霉素筛选和分化再生，获得21株潮霉素抗性植株。PCR检测和Southern Blot检测结果表明，有3株呈阳性检测反应，说明TYLCV-Rep基因已整合到番茄基因组中，阳性率为14.3%。烟粉虱接种试验结果表明，番茄转基因植株较非转基因植株对番茄黄化曲叶病毒的抗性明显增强。 关键词：复制酶基因；黄化曲叶病毒；番茄；遗传转化；表达载体
中图分类号：S436.412.1+1 文献标志码： A文章编号：1002-1302（2015）02-0041-04 收稿日期：2014-03-19
基金项目：国家大宗蔬菜产业技术体系建设专项（编号：CARS-25）；山东省高等学校科技计划 （编号：J07WG06、J09LC59、J10LC73、J12LE56）；潍坊科技学院校级课题（编号：W13K029、W13K033、W13K051）；山东半岛蓝色工程研究院科研计划（编号：sdlgy2013y014）。
作者简介：裴华丽（1978—），女，山东潍坊人，硕士，讲师，主要从事蔬菜分子育种研究。E-mail：peihuali2@163.com。
通信作者：刘永光，硕士，讲师，主要从事植物病理方面的研究。E-mail：
ygliu425@163.com。番茄在中国各蔬菜产区均有大面积的种植，在我国蔬菜周年供应中占有非常重要的地位。随着温室大棚的推广及蔬菜反季节栽培效益的提高，温室番茄栽培面积连年增长，其病害的发生也呈现逐步加重的趋势。近年来，在番茄主产区相继发现的番茄黄化曲叶病毒，对番茄植株的生长、开花、坐果等方面均产生严重的危害，给当地的番茄生产带来巨大的经济损失[1-6]。番茄黄化曲叶病毒（tomato yellow leaf curl virus，TYLCV）属双生病毒科（Geminiviridae）菜豆金色花叶病毒属（Begomovirus）[4-7]，是一类世界范围内广泛发生的单链环状DNA病毒。自1986年首次将烟草花叶病毒（ TMV） 外壳蛋白（ coat protein，CP） 基因导入烟草培育出抗TMV植株以来，利用病毒本身的基因导入植物获得抗病毒植株已成为抗病毒基因工程的重要手段。在番茄转基因抗病毒育种中，主要利用病毒的外壳蛋白基因和复制相关蛋白（replication-associated protein，Rep）基因。
番茄黄化曲叶病毒Rep基因植物表达载体的构建及对番茄的遗传转化
