联合运用多种手段证实亲子鉴定案件中D21S11基因座表
型1例
姜 磊1，徐倩楠1，2，朱如心1，盛 翔3，李 莉1 【期刊名称】中国司法鉴定 【年(卷),期】2019(000)003 【总页数】3
【关键词】法医遗传学；亲子鉴定；等位基因；测序
基金项目：国家自然科学基金（81601651）、（81625013）；十三五国家重点研发计划（2016YFC0800703）；中央级公益性科研院所项目（GY2018G-9）；上海市“科技创新行动计划”项目（16DZ1205500）；上海市法医学重点实验室资助项目（17DZ 2273200）；上海市司法鉴定专业技术服务平台资助项目（19DZ 2292700）
1案例
1.1 简要案情
因申报户口需要，孙某某（被检母亲）、张某某（被检父亲）与张某（孩子）来委托本院进行亲子鉴定。 1.2 检验过程 1.2.1 初次检验
按照中华人民共和国公共安全行业标准GA/T383-2014抽提血样DNA，采用GoldenEye 20A DNA身份鉴定系统（北京基点认知公司）进行复合PCR扩增，用3130 XL遗传分析仪（美国Thermo Fisher Scientific公司）进行毛细管电泳和基因型分析。所获得的分型图谱见图1～3。
1.2.2 初检结果的分析说明
D19S433等19个STR基因座均为人类的遗传学标记，遵循孟德尔遗传定律，联合应用可进行亲权鉴定，其累积非父（母）排除概率大于0.9999。
分型图谱显示，孩子在每个基因座的等位基因均可从被检母亲的基因型中找到来源；除D21S11基因座外，被检父亲均能提供给孩子必需的等位基因。在 D21S11 基因座（图 4），孩子的表型为“32.2”，被检父亲的表型为“29”，被检父亲不能提供给孩子必需的等位基因“32.2”，不符合孟德尔遗传定律。 1.2.3 第二次检验及结果分析
采用PowerPlex 21系统（美国Promega公司）进行复合PCR扩增，用3130 XL遗传分析仪进行毛细管电泳和基因型分析（五色标记的荧光强度阈值均设定为50RFU）。检验结果显示，相同基因座的分型结果与初检 （GoldenEye 20A DNA身份鉴定系统）相同。但是，在D21S11基因座（图5），被检父亲的“29”等位基因峰之后存在一小峰，孩子在相同位置亦检见一小峰，疑似有等位基因漏检现象。所以，换用其他试剂盒进行核验。 1.2.4 第三次检验及结果分析
采用Investigator 24plex QS系统（德国QIAGEN公司）进行复合PCR扩增，用3500 XL遗传分析仪（美国Thermo Fisher Scientific公司）进行毛细管电泳和基因型分析（六色标记的荧光强度阈值均设定为50RFU）。在D21S11基因座（图6），被检母亲的分型为“31，32.2”，孩子的分型为“29.2，32.2”，被检父亲的分型为“29，29.2”。其检验结果支持“1.2.3”中“等位基因漏检”的假设。 1.2.5测序验证
通过UCSC网站查找D21S11基因座核心序列，在STRBase网站查找重复单位，利用Primer 5.0软件设计引物序列，在NCBI网站验证所设计的引物能否扩增出目标片段。
通过以上方法设计D21S11基因座的测序引物，将被检母亲、孩子与被检父亲的DNA样本进行PCR扩增和克隆测序（每个样本都挑选5个以上克隆进行测序），D21S11基因座核心序列为（TAGA\\CAGA）。测序证实，在D21S11基因座，被检母亲的基因型为“31，32.2”，孩子的基因型为“29.2，32.2”，被检父亲的基因型为 “29，29.2”[1] 。使用 GoldenEye 20A DNA身份鉴定系统和PowerPlex 21系统分型时，被检孩子和父亲均漏检了等位基因“29.2”，而Investigator 24plex QS系统的检测结果准确无误。 1.2.6 结果与分析
依次选用GoldenEye 20A DNA身份鉴定系统、PowerPlex 21系统和Investigator 24plex QS系统对样本DNA进行PCR扩增，共获得24个STR基因座的基因型（D21S11基因座的基因型经克隆测序确认）。结果表明，孩子的等位基因均可从被检母亲和被检父亲的基因型中找到来源，符合孟德尔遗传规律。经计算，累积亲权指数分别为175760612.513、17536949184.581。 依据亲权鉴定技术规范GB/T 37223-2018，支持被检母亲是孩子的生物学母亲，支持被检父亲是孩子的生物学父亲。
2讨论
2.1 等位基因漏检现象
在亲权鉴定中，当发现被检父母某一方的某个等位基因不能遗传给子女时，除了需要考虑该基因座是否存在突变的可能外，还需注意该基因座是否存在等位
联合运用多种手段证实亲子鉴定案件中D21S11基因座表型1例
