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非那西丁的药代动力学研究实验报告
一.概述：
非那西丁(Phenacetin)为一种解热镇痛药，因为潜在副作用在临床已基本不使用。但由于其是CYP1A2酶的特异性底物，被广泛选择作为底物用于酶活性测定实验以及影响酶活性作用药物的研究。本学期临床药代动学实验课以非那西丁在大鼠体内的代谢实验、大鼠肝微粒体温孵实验两部分为例，通过实验设计，实验操作，结果评价等一系列过程，系统地学习了药代动力学中药物体内外的简单研究方法、实验数据的处理、以及相关药动学参数的计算与评价。
二.正文
1.非那西丁在大鼠体内的药代动力学研究
1.1实验目的
研究非那西丁在大鼠体内代谢的药代动力学，学习大鼠眼底静脉丛取血等操作。 1.2实验材料与方法
仪器：HPLC-UV色谱仪，高速冷冻离心机，涡旋振荡器； HPLC色谱条件：检测波长：254nm 色谱柱：inertsil-ODS-SP,5um,4.6*150mm 流速：1.0ml/min 柱温：40℃
流动相：40(乙腈)：60（50mM磷酸盐缓冲液）
（注：50mM磷酸盐缓冲液配制：6.8g磷酸二氢钾，加入150ml氢氧化钠溶液（0.1M），配制成1L的磷酸盐缓冲液）
试剂：非那西丁注射剂，对乙酰氨基酚标准品，肝素钠，10%高氯酸； 实验动物：雄性大鼠，180g—220g 1.3实验步骤
1.3.1标准曲线的制备：取空白血浆，加入对乙酰氨基酚标准品，使其浓度分别为0.156,0.313,0.625,1.25,2.50,5.00,10.00ug/ml。在给定的色谱条件下进行HPLC分析，以样品的峰面积对样品浓度进行线性回归。
1.3.2给药及血浆采集处理：取大鼠一只，尾静脉注射非那西丁（10mg/kg）后，分别于0，5,10,15,30,45,60,90,120min于尾静脉取血1
0.5ml，肝素抗凝。离心取200ul血浆。向血浆中加入100ul 10%高氯酸，涡旋振荡1min（转速为15000转/分钟），离心10min，取上清供HPLC分析。 1.4实验结果处理
表1 体内实验中对乙酰氨基酚标准曲线
浓度 准确度 理论峰面积 组别 峰面积ug/ml) （ (0.2554)0.156 1 19283
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14359
2 0.312 54390
(0.0889)33219 36462 3 0.625 0.0957 59355 4 65033 1.25 0.0158 106799 2.50 105142 5 0.0170 200067 5.00 6 196714 (0.0066)10.00 7
377336 379859
舍去第2组数据做图得对乙酰氨基酚的标准曲线（图1），用标准曲线的回归方程带入浓度计算标准曲线准确度（表1），可见除第1、2组数据外其他点基本符合 准确度<20% 这一条件（考虑到样品定量范围且第一组数据准确度基本接近20%，第1组数据不舍去），说明标准曲线有效，可用来计算定量样品。
图1 体内实验对乙酰氨基酚标准曲线A400000 350000300000250000200000
150000y = 36629x + 135692100000 = 0.9991R500000120246108C(ug/ml)
给药的大鼠血浆样本中的非10mg/kg以得到的标准曲线的回归方程计算以 那西丁的浓度得 大鼠血浆样本中非那西丁的浓度表2
2
浓度/取血时间
峰面积组别 /min （ug/ml)
1.007 1 6.5 50464 0.975 49283 2 10.5 0.779 42107 3 14.5 0.612 29.5 35993 4 -0.006 45 13359 5
注：第5组数据是有问题的，有可能与大鼠的死亡前代谢状态改变有关系，故后续处理舍去第5组数据。
静脉注射后非那西丁在大鼠体内的代谢符合一房室模型，以一房室模型拟合得
图2 非那西丁c-t一房室拟合1.4
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-0.0223xy = 1.1621e1.22 = 0.9401R1)lm0.8/gu0.6(/0.4c0.203035255010152040t/min
根据拟合方程计算非那西丁的药动学参数，得 c=1.1621ug/ml 0
Vd=x/ c=10(mg/kg)/1.1621(ug/ml)=8.60L/kg 00t=0.693/k=0.693/0.0223=31.08min 1/2CL=kVd=0.0223*8.60L/kg=0.192L/(min·kg)
AUC= x/(kVd)=10(mg/kg)/0.192L/(min·kg)=52.08mg/L·min 01.5讨论 1）标准曲线组数据为其他实验组同学数据，本组由于HPLC测定时仪器出倒峰，未取得实验数据。
2）取血点的设定：取血点应覆盖药物的吸收相、平衡相和消除相，一般设计在吸收相和平衡相各2-3个点，消除相内4-5个点。整个采样时间至少应为3-5个半衰期，或采样持续至峰浓度的1/10-1/20。查文献得非那西丁静注后在3
大鼠体内的半衰期一般为0.5h左右，故整个取血时间持续1.5-2.5h时较为合理。 3）色谱条件的设定：色谱条件的选择首先应保证测定物质能够良好的分离，同时还应该考虑方法的可行性，需要的操作时间等因素。
4）取血操作：应在取血前向EP管中加入适量肝素溶液，取入血液后立即上下翻动2-3次使肝素与血液混合防止血液凝固，但不可用力过猛以免溶血影响后续测定。
5） 数据分析：本组实验中，由于大鼠死亡，取得血浆样本的时间点较少，故拟合曲线的偏差也比较大。因此虽然最后由此求得的t处于一般范围1/2内，但因为数据较少，且为单只动物实验，不排除结果的偶然性。
2.大鼠肝微粒体温孵实验
2.1实验目的
了解肝微粒体及肝微粒体酶活性的评价方法,学习肝微粒体温孵液中对乙酰氨基酚浓度测定方法的建立。 2.2实验材料与方法
仪器：HPLC-UV色谱仪（色谱条件同前）、高速冷冻离心机、涡旋振荡器、恒温水浴锅； 试剂：大鼠肝微粒蛋白溶液、NADPH再生系统（0.5mM·NADP+、5mM·MgCl、10mM·G-6-P、1U·G-6-P脱氢酶）、对乙酰氨基酚、非那西丁、冰甲醇 2.3实验步骤
2.3.1.标准曲线的配制：180ul大鼠空白肝微粒体，加入20ul不同浓度的对乙酰氨基酚，配成对乙酰氨基酚浓度分别为1.56、3.12、6.25、12.5、25、50、100uM
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非那西丁药代动力学研究实验报告分析
