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应用高效液相色谱—二极管阵列检测器优化棉花体内多胺的测定方法
作者：张一名 刘玲玲 谢韫泽 孙艳香 冯雪贾永红 来源：《江苏农业科学》2016年第08期
摘要：应用高效液相色谱-二极管阵列检测器法（HPLC-DAD）对棉花体内多胺测定时的流动相比例及流速、多胺全光谱信息等进行分析，重点比较2种常用检测波长230、254 nm下的测定参数。最终确定检测波长为230 nm、流动相体积比V甲醇 ∶[KG-3]V水=80 ∶[KG-3]20、流速为0.6 mL/min为最佳色谱条件。该方法有较好的准确度、灵敏度，腐胺、亚精胺、精胺的回收率分别为98.58%、96.98%、99.62%，且非常稳定。以此色谱条件为基础测定棉花幼苗不同组织中多胺水平发现，叶片中3种多胺的含量明显高于根、茎组织；此外，不同组织内亚精胺含量最高。
关键词：棉花；幼苗组织；多胺含量；高效液相色谱；二极管阵列检测器 中图分类号： S562.01文献标志码： 文章编号：1002-1302（2016）08-0328-04
多胺（polyamines，PAs）是一类含有多个氨基的长链脂肪族化合物，广泛存在于生物体内。在植物代谢途径中，目前比较清楚的多胺形式主要有腐胺（putrescine，Put）、亚精胺（spermidine，Spd）、精胺（spermine，Spm）[1-2]。研究表明，多胺在植物体内是一类重要的生长调节因子，参与植物的细胞分裂[3-4]、性别分化[5]、果实成熟与衰老[6]、逆境适应[7-10]等重要生理过程。在分子水平的研究中还发现，多胺参与DNA的复制、转录、膜稳定、RNA和蛋白质的翻译[11]、DNA凝聚及激素的调控[12]等过程。另外，在人体中也存在大量多胺类物质，并与人类健康息息相关[13]。由于植物性食物是人体内多胺的重要来源之一[14]，因此，如何准确而快速地检测植物组织中的多胺技术越来越受到人们的重视。
多胺的测定以前主要用氨基酸分析仪、纸电泳等方法[15-16]，这2种检测方法样品回收率低，检测灵敏度也不高。目前多用衍生化的方法，即将多胺的一、二级氨基接在卤素原子上，另外还有接在荧光基团或对紫外有吸收的基团上，再通过气相（GC）或液相（HPLC）方法进行分离检测。其中，气相色谱刚刚应用在植物多胺的研究方向，虽然分析时间短，但是对试样要求高，前处理过程比较复杂[17]，并且应用质谱检测设备价格昂贵，且分离检测效果没有显著提高。自从1979年Redmond等采用苯甲酰化的方法以来，随着不断改进，高效液相色谱法已经成为较为成熟的检测植物体内多胺的方法[18-21]。目前主要应用荧光检测器（FLD）、紫外吸收检测器（UV）。其中，FLD法检测多胺的主要优势在于灵敏度高[22]，但要用到有毒流动相乙腈。另外，由于瑞利散射、拉曼散射的干扰，使荧光检测方法的条件构建和优化过程较为复杂，没有一定的专业基础较难完成。而紫外吸收法虽然灵敏度并不突出，但是可以用于
应用高效液相色谱—二极管阵列检测器
