实训二 植物病原真菌形态识别和临时玻片制备
一、实训目标
认识植物病原菌物营养体及其变态的类型，辨别病原菌物有性繁殖体、无性繁殖体及其产生的各种类型孢子，学会制作临时玻片。
二、实训材料、器具及药品
1．实训材料：植物病原菌物所致病害新鲜材料、PDA培养物、玻片标本、多媒体教学课件和挂图。
2．实训器具及药品：显微镜、载玻片、盖玻片、擦镜纸、吸水纸、通草、解剖刀、刀片、挑针、镊子、蒸馏水、（棉蓝）乳酚油、计算机及多媒体教学设备等。
三、实训步骤与要求 1. 观察菌物的营养体
（1）观察菌丝 在植物表面生长繁茂的霉状物或粉状物制片宜用挑取法。先在洁净的载玻片中央加一滴蒸馏水或乳酚油，用挑针从病组织或纯培养的菌落上，挑取少量瓜果腐霉病菌或根霉菌、立枯丝核菌或链格孢菌的菌丝体，放入蒸馏水或乳酚油中，盖上盖玻片，制成临时玻片镜检。观察菌丝形态、有无隔膜、颜色有无差别、分枝处有无缢缩。
病部病原体稀少、难以辩认霉层的病害标本制片可用刮取法，用两侧具刃的三角刮针(或刀片) 在浮载剂中略加湿润，在病部顺同一个方向刮取2～3次，使病原物粘于其上，然后将病原蘸在载玻片的浮载剂中镜检。
（2）观察菌物营养体的变态
①吸器：观察寄生植物表皮细胞的病原菌物可用撕取法。取感染白菜霜霉病或小麦白粉病的病叶，用刀片割破叶片表皮再用小镊子轻轻撕下，放在浮载剂中制片镜检吸器的形状和在细胞内的位置。
②假根：挑取甘薯软腐病菌平板培养物制片镜检，观察在孢囊梗基部的假根的形态和颜色。 ③菌核：观察瓜类菌核病、十字花科蔬菜菌核病的菌核标本。比较菌核的大小、形状和颜色，镜检菌核切片，比较菌核外部和内部组织菌丝细胞的颜色、形状、大小及排列情况。
④菌索：观察苹果或甘薯紫纹羽病菌的根状菌索。
⑤子座：在示范镜下观察麦角病菌头状子座的切片，注意其内部结构与菌核区别。 2. 观察菌物的繁殖体 （1）观察无性孢子
①游动孢子囊和游动孢子:挑取少量十字花科蔬菜白锈病疱斑内白色粉末，放载玻片上水滴中避光保湿培养3～4h，镜检孢子囊萌发产生的游动孢子在水中的游动情况。
②孢子囊和孢囊孢子：挑取根霉菌培养物制片，镜检孢囊梗顶端黑色圆形的孢子囊及其破裂后散出的孢囊孢子形态特征。
③分生孢子：用挑取、刮取或切片的方法观察交链孢菌、青霉菌、炭疸病菌等分生孢子的着生部位、形态大小、颜色和分隔等形状。
手持刀片将实验材料切成薄片的制作方法称为徒手切片法。切片前先准备一个盛有清水的培养皿，选取病状典型、病征明显的病组织材料，先在病征明显处切取病组织小块放在小木块上，用食指轻压住，随着手指慢慢地后退，用刀片将病组织小块切成很薄的丝或片，用毛笔轻扫在培养皿的水中，再用接种针挑取薄而合适的材料制片；也可用食指、中指夹住实验材料，材料要伸出食指外约2～3 mm，将刀口向内对着材料，并使刀片与材料切口基本保持平行，刀口由外向内、从左向右移动均匀地拉切，连续切下数片后，将刀片放在培养皿的水中晃动，切片即漂浮于水中；不便直接切片的细小、柔软或较薄材料，可夹在通草、接骨木、向日葵的茎髓或新鲜胡萝卜或马铃薯中间拉切。
④厚垣孢子：挑取瓜类枯萎病菌（或其他镰孢霉菌）的培养物制片、镜检，菌丝或孢子中个别细胞膨大、细胞壁加厚的孢子即厚垣孢子，观察其形状和颜色。
（2）观察有性孢子
①卵孢子：挑取疫霉的培养物（连同培养基）制片，镜检观察藏卵器、雄器和卵孢子形态、色泽。或取谷子白发病病穗，制片镜检卵孢子形态。
②接合孢子：观察接合孢子玻片标本，注意观察其形状、颜色、表面纹饰。
③子囊孢子：采用挑、刮或切片的方法制作临时玻片或直接观察永久玻片，镜检桃缩叶病菌、瓜类白粉病菌、槐树白粉病菌、苹果树腐烂病菌和十字花科蔬菜菌核病子囊盘，观察子囊果的类型，子囊的形态和子囊孢子的数目、形态、颜色。
④担子孢子：挑取梨胶锈菌冬孢子萌发材料观察担子的形态、隔膜，小梗着生部位，数目，担孢子形态，颜色和数目。
四、作业
1. 认识病原菌物的菌丝、无性孢子和有性孢子有何意义？ 2. 菌物营养体及其变态的作用是什么？
3. 针对不同的病征类型在显微镜观察时选择哪种制片方法？
植物病原真菌形态识别和临时玻片制备.
