全自动核酸提取仪对三种性传播病原体检测的性能评价

全自动核酸提取仪对三种性传播病原体检测的性能评价*

张 睿，叶阿里，孔令君，窦亚玲，伊 洁

【摘 要】目的 评价全自动核酸(RNA)提取仪(型号MagX)对沙眼衣原体(Chlamydia trachomatis，CT)、淋病奈瑟菌(Neisseria gonorrhoeae，NG)和解脲脲原体(Ureaplasmaurealyticum，UU)检测结果应用于临床的可行性。方法 收集检测CT样本159例、NG样本128例、UU样本144例，应用荧光核酸恒温扩增检测技术(Simultaneous Amplification and Testing，SAT)，同一样本分别采用手工提取分装加样和MagX提取分装加样两种检测方法，然后进行实时荧光PCR。以手工检测结果为金标准，对MagX检测结果进行阳性符合率(灵敏度)、阴性符合率(特异度)、总符合率(准确度)的评价。同时，对该仪器进行防污染验证。全自动核酸(RNA)提取仪与手工检测结果进行Kappa一致性分析。结果 159例CT，128例NG和144例UU样本的阳性符合率、阴性符合率、总符合率依次为CT：0.910 6，92.59%，98.48%和97.48%；NG：0.938 3，100.00%，98.18%和98.44%；UU：0.885 6，93.33%，95.24%和94.44%；其Kappa系数均>0.8(CT：Kappa=0.910 6，NG：Kappa=0.938 3，UU：Kappa=0.885 6)，CV值均<5%；没有携带污染现象存在。结论 上海仁度生物科技生产的CT，NG和UU核酸检测试剂盒(RNA恒温扩增)在全自动核酸(RNA)提取仪(型号MagX)的检测符合临床检测标准，可在临床使用。

【期刊名称】现代检验医学杂志 【年(卷),期】2017(032)006 【总页数】3

【关键词】沙眼衣原体；淋病奈瑟菌；解脲脲原体；全自动核酸(RNA)提取仪 性传播微生物，沙眼衣原体(chlamydia trachomatis，CT)、淋病奈瑟菌(neisseria gonorrhoeae，NG)、解脲脲原体(ureaplasma urealyticum，UU)[1]可导致淋病、非淋球菌性尿道炎、宫颈炎、宫颈糜烂、女性不孕和男性免疫性不育[2，3]等，是人类泌尿生殖道的常见病原体，也是性传播疾病(sexually transmitted diseases，STD)的主要病原[4，5]。目前检测其方法基本都以手工法为主。

本研究旨在验证全自动核酸(RNA)提取仪(型号MagX)对CT，NG和UU检测的适用性和准确度以及临床应用的可行性。

1 材料与方法

1.1 研究对象 收集2015年9～10月北京协和医院就诊的CT，NG和UU疑似感染者和正常体检者的检测样本，CT样本159例、 NG样本128例、UU样本144例。样本类型为尿液和拭子，-20℃保存。

1.2 试剂和仪器 CT，NG，UU核酸检测试剂盒(RNA恒温扩增) (上海仁度生物科技有限公司)，磁珠、扩增检测液、磁力架、吸引器、全自动核酸(RNA)提取仪(型号MagX)；采用RocheLight Cycler480Ⅱ(美国)主机扩增以及Light Cycler?480 Software release 1.5.0 SP4软件进行数据分析。

1.3 操作步骤 严格按照试剂说明书，采用手工磁珠提取法对样本进行核酸提取，并手工加入PCR反应试剂和提取的核酸模板于96孔板上；同一样本同步在MagX上进行，具体操作步骤如下：先将样本放入样本架上，放好提取试剂，PCR扩增试剂，按相应位置放置吸头、六连排反应管和PCR扩增反应管，按仪器指令在电脑屏幕确认后开始进行实验。仪器通过条形码识别每份样本，采

用磁珠法自动提取核酸、配制PCR反应体系并加样到PCR反应管孔中。最后，将手工和MagX加好的PCR反应管放入Roche Light Cycler480Ⅱ，用相同的PCR程序进行扩增反应。MagX可以将记忆的样本信息，如样本架位置、条形码信息(患者姓名、条码号、检测项目)等传送给PCR仪，确保样本放置的顺序和PCR仪顺序一致，避免人为操作失误。手工检测需将信息手工录入。最后，将手工和MagX检测的数据输入到Excel表中，分别统计两种方法的阴性、阳性个数。

1.4 MagX精密度评估 将同一批次三种阳性质控品在10天内重复进行20次实验，通过循环阈值(Cycle threshold，Ct)计算CV%。

1.5 评估MagX携带污染 在样本架上，将高浓度阳性质控品与阴性样本(0.9 g/dl生理盐水)以相邻的放置方式循环放置，测试其携带污染情况，验证仪器的防污染能力。5次防污染验证标准：阳性均需检出，阴性不得检出阳性。 1.6 质量控制 测定过程中所有操作均严格按照实验室室内质量控制文件进行。试验过程中，同时测定试剂盒自带的阴性、阳性质控。如果当天质控在控，则纳入当天测定数据，若质控失控，需重新测试。同时原始记录保持完整，以确保实验数据准确性和可溯源性。

1.7 统计学分析 采用Excel 2007及SPSS17.0统计软件，进行Kappa一致性分析和四格表分析。Kappa系数≥0.8，为高度一致，认为两种方法检测结果等效；0.4≤Kappa系数<0.8认为一致，需进行阳性符合率和阴性符合率比较；Kappa系数<0.4则认为两种方法检测结果不一致，两系统不等效。

2 结果

2.1 MagX与手工检测结果比较 见表1～3。CT检测样本159例，Kappa系数