miR-506在人结肠癌羟基喜树碱多药耐药中的功能研究
童锦禄;徐锡涛;朱明明;陈翔;聂芳;冉志华;萧树东
【期刊名称】《胃肠病学和肝病学杂志》 【年(卷),期】2010(019)007
【摘要】目的 探讨miR-506在人结肠癌羟基喜树碱多药耐药中的潜在作用.方法 首先通过PCR从基因组DNA中克隆出包含miR-506前体的片段,将其连接至miRNA表达载体pMIF-cGFP-Zeo中,测序进行验证.将构建成功的pMIF-miR-506转染至低表达miR-506的亲本细胞SW1116中,加入含G418的选择性培养基进行选择性培养.运用RT-PCR验证稳定转染pMIF-miR-506的SW1116细胞株中的miR-506的表达情况,MTT法检测稳定转染pMIF-miR-506的SW1116细胞株和亲本细胞SW1116对羟基喜树碱的敏感性差异,Annexin V/PI检测各自对羟基喜树碱的凋亡情况.结果 测序结果表明hsa-miR-506的前体序列被成功地构建至miRNA表达载体pMIF-cGFP-Zeo中.TaqMan荧光定量PCR技术检测发现,相比亲本细胞SW1116,稳定表达绿色荧光的SW1116细胞克隆中miR-506的含量显著升高,约为33.7±8.3倍.细胞增殖试验表明稳定转染pMIF-miR-506的SW1116细胞株的IC50为(280±13) μg/L,而对照组SW1116的IC50为(152±12) μg/L.同时还发现在相同浓度的羟基喜树碱作用下,亲本细胞SW1116较稳定转染pMIF-miR-506的SW1116细胞株的凋亡细胞比率增高(150 μg/L:7.8%±1.7% vs 5.4%±1.2%;300 μg/L:33.6%±3.9% vs 18.2%±4.7%).结论 成功地构建了过表达miR-506的载体pMIF-miR-506;过表达miR-506能够增加SW1116对羟基喜树碱的抵抗性. 【总页数】5页(626-630)
miR-506在人结肠癌羟基喜树碱多药耐药中的功能研究
