第二章 DNA重组克隆的单元操作
练习题
质粒的分子生物学与质粒载体（练习题）
一、填空题
1. 基因工程中有 3 种主要类型的载体： 、 、 。 2. 由于不同构型的 DNA 插入EB 的量不同，它们在琼脂糖凝胶电泳中的迁移率也不同，SC DNA 的泳动速度 ，OC DNA 泳动速度 ，L DNA 居中，通过凝胶电泳和EB 染色的方法可将不同构型的DNA 分别开来。
3. 质粒的复制像染色体的复制一样，是从特定的起始点开始的。然而，质粒的复制可以是向的、或是 向的。在杂种质粒中，每个复制子斑点都可以有效地加以使用。但是在正常条件下只有一个起点可能居支配地位。并认为：当某些具有低拷贝数的严紧型质粒与松弛性质粒融合后，在正常情况下 的复制起点可能被关闭。
4. 就 克 隆 一 个基因(DNA 片段) 来说， 最简单的质粒载体也必需包括三个部
分： 、 、 。另外，一个理想的质粒载体必须具有低分子量。
5. 如果两个质粒不能稳定地共存于同一个寄主细胞中，则属于 群，这是因为它们的 所致。
6. 质粒拷贝数是指细胞中 。
7. 复制子由三部分组成：(1) (2) (3) 。 8. 酵母的 2μm 质粒有 ，可以配对形成哑铃结构。
9. 一个带有质粒的细菌在有 EB 的培养液中培养一段时间后，一部分细胞中已测不出质粒，这种现象叫 。
10. pBR322 是一种改造型的质粒，它的复制子来源于 ，它的四环素抗性基因来自于 ，它的氨苄青霉素抗性基因来自于 。
11. 粒的消失同染色体基因的突变是不同的，前者不能恢复，后者可以通过恢复 该基因的性状。
12. ColEl 质粒复制的起始需要三种酶，即 、 和 。
13. YAC 的最大容载能力是 ，BAC 载体的最大容载能力是 。 14. pSCl01 是一种 复制的质粒。
15. 把那些没有可检测表型的质粒称为 。
16. 转座子主要由下列部分组成：(1) (2) (3) 。
17. pUCl8 质粒是目前使用较为广泛的载体。pUC 系列的载体是通过 和 两种质粒改造而来。它的复制子来自 ，Amp 抗性基因则是来自 。
二、判断题
1．迄今发现的质粒DNA 都是环状的。
2．线性质粒同环状质粒一样都不带有宿主必需的基因。
3．有a、b、c 三个质粒，因为a 和b 能够共存于一个细胞，a 和c 也可共存于同一个细胞， 所以b 和c 一定能够共存于同一个细胞。
4. 插入元件(1S)也是一种转座元件，它除了有转座酶基因外，还有附加基因。
5. 如果两个不同的质粒可以稳定地共存于同一个细胞中，这两种质粒则属于同一个不亲和 群。
6. 一个带有反向重复序列的双链 DNA 经变性后，复性时其单链可形成发夹环。
7. 能够在不同的宿主细胞中复制的质粒叫穿梭质粒。
8．任何一种质粒都可以用氯霉素扩增的方法，增加它的拷贝数。
9．只有完整的复制子才能进行独立复制，一个失去了复制起点的复制子不能进行独立复制。 10．CsCl-EB 密度梯度离心法纯化SC DNA 原理是根据EB 可以较多地插入到SC DNA 中， 因而沉降速度较快。
11．质粒ColEl 同pSCl01 共整合后，得到重组质粒pSCl34，具有两个复制起点，这两个起 点在任何细胞中都是可以使用的。
12．pBR322 可以用于黏性末端连接、平末端连接和同聚物接尾法连接，无论用哪种方法连 接，都可以用同一种酶回收外源片段。
13．所谓穿梭质粒载体是能够在两种以上的不同宿主细胞中复制的质粒，所用的复制起点不 同。
14．一般情况下，质粒既可以整合到染色体上，也可以独立存在。
15．ColEl 是唯一用作基因工程的自然质粒载体，它具有四环素抗性标记，因而很容易选择。 16．某一染色体DNA 经内切酶Sal I 切割后，产生了若干个具有黏性末端的DNA 片段，将 这些片段分别在T4 DNA 连接酶的作用下自身连接成环，然后导入受体细胞，都可以进 行独立地复制。
17．如果细菌的某种表型特征在UV 处理下丧失后不再恢复，这种表型有可能是质粒赋予的。 18．基因克隆中，低拷贝数的质粒载体是没有用的。
三、选择题(单选或多选)
1．线性质粒复制的引物来自于【 】 A细胞中合成的小分子RNA B自身末端的端粒序列 C外加的寡聚DNA
D自身断裂的小分子DNA
2．下面关于松弛型质粒(relaxed plasmid)性质的描述中，【 】是不正确的 A质粒的复制只受本身的遗传结构的控制，而不受染色体复制机制的制约， 因而有较多的拷贝数
B可以在氯霉素作用下进行扩增 C通常带有抗药性标记
D同严紧型质粒融合后，杂合质粒优先使用松弛型质粒的复制子
3．基因工程中所用的质粒载体大多是改造过的，真正的天然质粒载体很少，在下列载 体中只有【 】被视为用作基因工程载体的天然质粒载体 ApBR322 BpSCl01 CpUBll0 DpUCl8
4．下列哪种克隆载体对外源DNA 的容载量最大?【 】
A 质粒；B 黏粒；C 酵母人工染色体(YAC)；D λ噬菌体；E cDNA 表达载体 5．反向重复序列：【 】
A 可以回折形成发夹结构； B 可以是某些蛋白的结合位点 C 参与转座子的转座； D 以上说法都不对 6．松弛型质粒：【 】
A 在寄主细胞中拷贝数较多； B 可用氯霉素扩增 C 一般没有选择标记； D 上述A、B两项正确
7．ColEl 是惟一用作基因工程载体的自然质粒，这种质粒： 【 】 A 是松弛复制型； B 具有四环素抗性
C 能被氯霉素扩增 ；D 能产生肠杆菌素
8．同一种质粒DNA，以三种不同的形式存在，电泳时，它们的迁移速率是：【 】 A OC DNA>SC DNA>L DNA； B SC DNA>L DNA>OC DNA C L DNA>OC DNA>SC DNA ； D SC DNA>OC DNA>L DNA
9．pBR322 是一种改造型的质粒，含有两个抗性基因，其中四环素抗性基因来自：【 】 A ColEl ；B；Ri 质粒； C pSCl01； D pUCl8
10．关于质粒的相容性，下面哪一种说法不正确? 【 】 A 不同相容群的质粒能够共存于同一个细胞
B 质粒可以分成若干个不相容群，但不能分成若干个相容群 C 如果a、b 两种质粒不相容，说明它们的复制机制相同
D 属于同一个不相容群中的质粒，不仅复制机制相同，而且拷贝数和分子量也相同 11．关于穿梭质粒载体，下面哪一种说法最正确?【 】 A 在不同的宿主中具有不同的复制机制 B 在不同的宿主细胞中使用不同的复制起点 C 在不同的宿主细胞中使用不同的复制酶 D 在不同的宿主细胞中具有不同的复制速率
12．能够用来克隆32kb 以下大小的外源片段的质粒载体是【 】 A charomid； B plasmid； C cosmid ；D phagemid 13．第一个作为重组DNA 载体的质粒是( )
A pBR322 ；B ColEl； C pSCl01； D pUCl8 14．T1 质粒：【 】
A 可从农杆菌转到植物细胞中 B 作为双链DNA 被转移 C 在植物中导致肿瘤
D 介导冠瘿碱的合成，作为细菌的营养物和植物的生长激素 E 需要细菌的vir 基因帮助转移 F 在植物细胞中作为染色体外质粒 15.载体的功能是 【 】
I 运送外源基因高效进入受体细胞 II 为外源基因提供复制能力 III 为外源基因提供整合能力 Ａ I ；Ｂ I + II ；Ｃ I + III；Ｄ II + III ；Ｅ I + II + III 16. 下列有关质粒分子生物学的叙述，错误的是 【 】
Ａ 质粒是共价环状的双链 DNA 分子；Ｂ 天然 质粒一般不含有限制性内切酶的识别序列 Ｃ 质粒在宿主细胞内能独立于染色体 DNA 自主复制；Ｄ 松弛复制型的质粒可用氯霉素扩增 Ｅ 质粒并非其宿主细胞生长所必需
17. 多聚接头（ Polylinker ）指的是 【 】
Ａ 含有多种限制性内切酶识别及切割顺序的人工 DNA 片段
Ｂ 含有多种复制起始区的人工 DNA 片段；Ｃ 含有多种 SD 顺序的人工 DNA 片段 Ｄ 含有多种启动基因的人工 DNA 片段；Ｅ 含有多种特定密码子的人工 DNA 片段 18.λ -DNA 体外包装的上下限是天然 λ-DNA 长度的 【 】
基因工程考试 质粒的分子生物学与质粒载体
