江西***药业股份有限公司GMP文件
检验操作规程
题目：覆盆子原药材检验操作规程 编号：TS-GC-YL-20140-02 制定人： 制定日期2020 年 月 日 版本：2 页数：1/5 审核人： 审核日期2020 年 月 日 颁发部门：质 量 部 批准人： 批准日期2020年 月 日 生效日期2020 年 月 日 目的：规范覆盆子原药材检验操作 范围：覆盆子原药材检验 分发部门： 质量部、 化验室、生产部 标 题 正 文 1 标准依据：《中国药典》2020年版一部及四部 2 【性状】 2.1 仪器：直尺。 2.2 方法：取本品,置日光下观察,并用直尺测量:本品为聚合果，由多数小核 果聚合而成，呈圆锥形或扁圆锥形，高0.6～1.3cm，直径0.5～1.2cm。表面黄绿色或淡棕色，顶端钝圆，基部中心凹入。宿萼棕褐色，下有果梗痕。 小果易剥落，每个小果呈半月形，背面密被灰白色茸毛，两侧有明显的网 纹，腹部有突起的棱线。体轻，质硬。气微，味微酸涩。 【鉴别】 3 （1）显微鉴别 3.1 仪器与试剂：生物显微镜、酒精灯，水合氯醛、稀甘油等。 3.1.1 方法：取本品适量，用水合氯醛装片，置显微镜下观察：（1）本品粉 3.1.2 末棕黄色。非腺毛单细胞，长60～450μm，直径12～20μm，壁甚厚，木 化，大多数具双螺纹，有的体部易脱落，足部残留而埋于表皮层，表面观 圆多角形或长圆形，直径约至23μm，胞腔分枝，似石细胞状。草酸钙簇晶 较多见，直径18～50μm。果皮纤维黄色，上下层纵横或斜向交错排列。 （2）薄层鉴别 3.2 3.2.1 仪器与试剂：分析天平、硅胶G薄层板、层析缸、甲醇、超声仪、三氯化铝试液、取椴树苷对照品、甲酸、乙酸乙酯等。 方法：（2）取椴树苷对照品，加甲醇制成每1ml含0.1mg的溶液，作 3.2.2 为对照品溶液。照薄层色谱法（通则0502）试验，吸取〔含量测定〕山柰 酚-3-O-芸香糖苷项下的供试品溶液5μl，及上述对照品溶液2μl，分别 点于同一硅胶G薄层板上，以乙酸乙酯-甲醇-水-甲酸（90：4：4：0.5） 为展开剂，展开，取出，晾干，喷以三氯化铝试液，在105℃加热5分钟， 在紫外光灯（365nm）下检视。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置 上，显相同颜色的荧光斑点。 【检查】 4 水分 不得过12.0％（通则0832第二法）。 4.1 4.1．1 仪器：电热鼓风干燥箱、分析天平、粉碎机、药筛等。 4.1.2 方法：取供试品2-5g，平铺于干燥至恒重的扁形称量瓶中，厚度不超过5mm，疏松供试品不超过10mm，精密称定，打开瓶盖在100－105℃干燥5 小时，将瓶盖盖好，移置干燥器中，冷却30分钟，精密称定重量，再在上 述温度干燥1小时，冷却，称重至连续两次称重的差异不超过5mg为止。 根据减失的重量，计算供试品中的含水量（%）。 4.1.3 计算公式：
第 1 页 共 5 页
江西***药业股份有限公司GMP文件
4.2 4.2.1 4.2.2 4.2.3 4.3 4.3.1 4.3.2 4.4 4.4.1 4.4.2
W样+W0－W1 水分% = ×100% W样 式中： W0 称量瓶的重量（g）。 W1称量瓶与样品的重量（g）。 W样样品的重量（g）。 总灰分 不得过9.0％（通则2302）。 仪器：粉碎机、药筛、分析天平、坩埚、箱式电阻炉等。 方法：取供试品2～3g，过二号筛混合均匀后，置炽灼至恒重的坩埚中称定重量，缓缓炽热，注意避免燃烧，至完全炭化时，逐渐升高温度至500～600℃，使完全灰化至恒重。根据残渣重量，计算供试品中总灰分的含量（%）。 计算公式： W1-W0 总灰分% = ×100% W样 式中： W0 ----------- 坩埚重量(g)。 W1----------- 坩埚与灰分的重量(g)。 W样----------- 样品的重量(g)。 酸不溶性灰分 不得过4.0%（通则2302）。 方法：取上述灰分，加入稀盐酸10ml，用表面皿覆盖坩埚，置水浴上加热10分钟，表面皿用热水5ml冲洗，洗液并入坩埚中，用无灰滤纸滤过，坩埚内的残渣用水洗于滤纸上，并洗涤至洗液不显氯化物反应为止，滤渣连同滤纸移至同一坩埚中，干燥，炽灼至恒重。根据残渣重量，计算供试品中酸不溶性灰分的含量（%）。 计算公式： W1-W0 酸不溶性灰分 % = ×100% W样 式中: W0-----------坩埚的重量（g）。 W1-----------酸不溶性灰分与坩埚的重量（g） W样-----------样品的重量（g）。 二氧化硫残留量：照二氧化硫残留量测定法（通则 2331)测定，不得过150mg/kg 仪器与试剂：两颈圆底烧瓶、电热套、竖式回流冷凝管、磁力搅拌器、分析天平、甲基红乙醇溶液指示剂、氢氧化钠滴定液滴、盐酸溶液（6mol/L)等。 方法：测定法取药材或饮片细粉约10g(如二氧化硫残留量较髙，超过1000mg/kg，可适当减少取样量，但应不少于5g),精密称定，置两颈圆底烧瓶中，加水300?400ml。打开回流冷凝管开关给水，将冷凝管的上端二氧化硫气体导出口处连接一橡胶导气管置于100ml锥形瓶底部。锥形瓶内加入3%过氧化氢溶液50ml作为吸收液（橡胶导气管的末端应在吸收液液面以 ---------------------------- --------------------------- --------------------------- -第 2 页 共 5 页
江西***药业股份有限公司GMP文件
下）。使用前，在吸收液中加人3滴甲基红乙醇溶液指示剂（2.5mg/ml), 并用0.Olmol/L氢氧化钠滴定液滴定至黄色（即终点；如果超过终点，则 应舍弃该吸收溶液）。开通氮气，使用流量计调节气体流量至约0.2L/min； 打开分液漏斗的活塞，使盐酸溶液（6mol/L)10ml流入蒸馏瓶，立即加热两 颈烧瓶内的溶液至沸，并保持微沸；烧瓶内的水沸腾1.5小时后，停止加 热。吸收液放冷后，置于磁力搅拌器上不断搅拌，用氢氧化钠滴定 （O.Olmol/L)滴定，至黄色持续时间20秒不褪，并将滴定的结果用空白实 验校正。 4.4.3 计算公式： 6 （V供-V空）×C×0.032×10 二氧化硫残留量（mg/kg） = W供 式中： V供为供试品溶液消耗氢氧化钠滴定液的体积，ml； V空 为空白消耗氢氧化钠滴定液的体积，ml； C 为氢氧化钠滴定液的浓度，mol/L； W供为供试品的重量，g。 0.032为lml氢氧化钠滴定液（lmol/L)相当的二氧化硫的质量，g。5 【浸出物】 照水溶性浸出物测定法（通则2201）项下的热浸法测定，不得少于9.0% 。 仪器与试剂：电热鼓风干燥箱、分析天平、蒸发皿、数显恒温水浴锅等。 5.1 方法：取供试品约2～4g，称定重量，置100～250ml的锥形瓶中，精5.2 密加入水50～100ml，塞紧，称定重量，静置1小时后，连接回流冷凝管， 加热至沸腾，并保持微沸1小时。放冷后，取下锥形瓶，密塞，称定重量， 用水补足减失的重量，摇匀，用干燥滤器滤过。精密量取滤液25ml，置已 干燥至恒重的蒸发皿中，在水浴上蒸干后，于105℃干燥3小时，移置干燥 器中，冷却30分钟，迅速精密称定重量，除另有规定外，以干燥品计算供 试品中醇溶性浸出物的含量（%）。 5.3 计算公式： （W1-W0）×V0 浸出物% = ×100% W样×（1－水分）×V1 式中： W0 ------- 蒸发皿的重量（g）。 W1 -------- 浸出物与蒸发皿的重量（g）。 W样------- 样品的重量（g）。 V0 ------- 加溶媒体积 （ml）。 V1------- 取续滤液的体积 （ml）。 【含量测定】 6 鞣花酸 照高效液相色谱法（通则0512）测定。本品按干燥品计算，6.1 含鞣花酸（C14H6O8）不得少于0.20%。 仪器与试剂：电子分析天平、高效液相色谱仪、乙腈、甲醇、磷酸、鞣6.1.1 花酸对照品等。 色谱条件与系统适用性试验 以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以6.1.2 乙腈-0.2%磷酸溶液（15： 85）为流动相；检测波长为254nm。理论板数按 第 3 页 共 5 页
江西***药业股份有限公司GMP文件
6.1.3 6.1.4 6.1.5 6.1.6 6.2 6.2.1 6.2.2 6.2.3 6.2.4 6.2.5 6.2.6 鞣花酸峰计算应不低于3000。 对照品溶液的制备 取鞣花酸对照品适量，精密称定，加70%甲醇制成每1ml含5μg的溶液，即得。 供试品溶液的制备 取本品粉末（过四号筛）约0.5g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入70%甲醇50ml，称定重量，加热回流1小时，放冷，再称定重量，用70%甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，精密量取续滤液1ml，置5ml量瓶中，用70%甲醇稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得。 测定法 分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定，即得。 本品按干燥品计算，含鞣花酸（C14H6O8）不得少于0.20%。 计算公式： A样 × C对 ×f 含量% = ×100% m ×（1－水分）×A对 式中： A样 ------------------------- 样品的面积。 A对 ------------------------ - 对照品的面积。 C对 ------------------------- 对照品的浓度(mg/ml)。 m ------------------------- 样品的重量（g）。 f ------------------------- 稀释体积。 山柰酚-3-0-芸香糖苷 照高效液相色谱法（通则0512）测定。本品按干燥品计算，含山柰酚-3-O-芸香糖苷（C27H30O15）不得少于0.03%。 仪器与试剂：电子分析天平、高效液相色谱仪、乙腈、甲醇等。 色谱条件与系统适用性试验 以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈-0.2%磷酸溶液（15：85）为流动相；检测波长为344nm。理论板数按山柰酚-3-O-芸香糖苷峰计算应不低于3000。 对照品溶液的制备 取山柰酚-3-O-芸香糖苷对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1ml含80μg的溶液，即得。 供试品溶液的制备 取本品粉末（过四号筛）约1g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入70%甲醇50ml，称定重量，加热回流提取1小时，放冷，再称定重量，用70%甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，精密量取续滤液25ml，蒸干，残渣加水20ml使溶解，用石油醚振摇提取3次，每次20ml，弃去石油醚液，再用水饱和正丁醇振摇提取3次，每次20ml，合并正丁醇液，蒸干，残渣加甲醇适量使溶解，转移至5ml量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得。 测定法 分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定，即得。 本品按干燥品计算，含山柰酚-3-O-芸香糖苷（C27H30O15）不得少于0.03%。 计算公式： A样 × C对 ×f 含量% = ×100% m ×（1－水分）×A对 式中： A样 ------------------------- 样品的面积。 第 4 页 共 5 页
江西***药业股份有限公司GMP文件
A对 ------------------------ - 对照品的面积。 C对 ------------------------- 对照品的浓度(mg/ml)。 m ------------------------- 样品的重量（g）。 f ------------------------- 稀释体积。
第 5 页 共 5 页
YL-20140覆盆子原料检验操作规程
