无患子基因组DNA提取及ISSR-PCR反应体系的建立与优化

无患子基因组DNA提取及ISSR-PCR反应体系的建立与

优化

姜翠翠;卢新坤;方智振;郭有枝;姜业先;刘献勇;叶新福

【期刊名称】《福建果树》 【年(卷),期】2013(000)001

【摘要】应用改良CTAB法提取了无患子基因组DNA,该方法具有操作过程简单、耗时少、能有效降低无患子基因组DNA提取过程中酚类化合物、多糖等杂质的污染.正交试验研究了dNTP浓度、引物浓度、Taq DNA聚合酶这3个因素对ISSR-PCR反应的影响,建立并优化了适合于无患子ISSR-PCR的反应体系.优化的反应总体系20μl含1 ×PCR Buffer,0.4 mmol· L-1 dNTP,0.8μmol· L-1引物,0.75 U Taq DNA聚合酶,20 ng DNA模板.使用此ISSR扩增反应体系,获得了部分不同种质无患子DNA的清晰条带,验证了该体系的稳定性.优化的反应体系为后续无患子遗传多样性的研究奠定了基础. 【总页数】5页(19-23)

【关键词】无患子;ISSR;正交优化;PCR反应体系

【作者】姜翠翠;卢新坤;方智振;郭有枝;姜业先;刘献勇;叶新福

【作者单位】福建省农业科学院果树研究所,福建福州,350013;福建省农业科学院果树研究所,福建福州,350013;福建省农业科学院果树研究所,福建福州,350013;福建源华林业生物科技有限公司;福建源华林业生物科技有限公司;福建源华林业生物科技有限公司;福建省农业科学院果树研究所,福建福州,350013 【正文语种】中文 【中图分类】