食品中三种金黄色葡萄球菌检测方法的对比分析

食品中三种金黄色葡萄球菌检测方法的对比分析

□ 胡路平 季 昱 杭州市富阳区食品安全检验检测中心

【摘 要】制作一系列浓度梯度的金黄色葡萄球菌试验菌液，采用检测试纸法、Baird-Parker平板国家标准法和PCR法三种方法模拟对食品中金黄色葡萄球菌进行检测，通过结果分析对三种方法的优缺点进行对比和归纳。 【期刊名称】食品安全导刊 【年(卷),期】2024(000)015 【总页数】2

【关键词】金黄色葡萄球菌；检测试纸法；Baird-Parker平板国标法；PCR法 金黄色葡萄球菌是食品中的重要微生物检测指标，是造成食品污染、细菌性食物中毒等的主要食源性致病菌之一。在冷冻食品、动物性食品和蔬菜制品、粮食制品等食品中常有检出[1]。在我国乃至全球，因金黄色葡萄球菌造成的食物中毒事件屡见不鲜。本研究采用检测试纸法[2]、Baird-Parker平板（以下简称BP平板）国家标准法[3]和常规PCR法三种方法，对10-1 CFu/ml至103 CFu/ml系列浓度梯度的金黄色葡萄球菌试验菌液分别进行定性和定量的检测和试验，通过对不同检验方法的比较和研究，分析各自的优缺点，具有一定的研究价值和现实意义。

1 材料与方法

1.1 主要实验材料和设备

金黄色葡萄球菌菌株ATCC25923，购买自广东省食品微生物安全工程技术研究开发中心。BP平板、冻干兔血浆等其它试剂材料，购买自广东环凯微生物科技有限公司。金黄色葡萄球菌PetrifilmTM检测试纸，由美国3M公司生产。

全自动微生物鉴定分析仪VITEK 2 Compact及配套GP检测卡、试剂，由法国生物梅里埃制造和生产。实时荧光定量PCR基因扩增仪7500型及配套试剂盒，由美国ABI制造和生产。 1.2 方法

将购得的金黄色葡萄球菌菌株ATCC25923复活、传代至2代，转种于营养琼脂小斜面，将纯菌苔接种于试管中，36 ℃培养18 h制得试验菌液，菌液浓度约为2.0×105 CFU/mL。用无菌生理盐水进行10倍稀释获得相应稀释度菌液。 1.2.1 检测试纸法

方法详见SN/T 1895-2007《食品中金黄色葡萄球菌的快速计数法PetrifilmTM测试片法》。具体检测步骤和判断依据参照检测试纸说明书。 1.2.2 BP平板国家标准法

根据GB4789.10-2016《食品安全国家标准 食品微生物学检验 金黄色葡萄球菌检验》第一法定性检验和第二法平板计数法进行实验操作。其中定性检验的主要步骤有检样处理、增菌、分离、镜检、肠毒素检验等，定量实验主要步骤有：检样处理、接种、培养、计数和确认试验等。 1.2.3 常规PCR法(聚合酶链式反应技术）

常规PCR方法能够对致病菌快速定性，但是如果想要进行金黄色葡萄球菌定量分析，则需要在常规PCR 方法的基础上通过加入荧光染料等手段才能实现[4]。本次研究并未对金黄色葡萄球菌进行PCR定量试验。本次定性试验，主要是将一系列稀释度菌液中的金黄色葡萄球菌DNA提取，经过处理与对照一起加入配套试剂上机扩增，最后得出定性结果。

2 结果与分析

2.1 定性检测结果比较

由实验可知，三种金黄色葡萄球菌定性检测方法在本次研究所选取的103 CFu/ml至10-1 CFu/ml 5个菌液稀释度中，检测灵敏度随着菌液稀释度降低均呈下降趋势，检测灵敏度排序为：BP平板国标法＜检测试纸法＜常规PCR法。在低浓度情况下，BP平板国家标准法（100CFu/ml及更低稀释度）和检测试纸法（10-1 CFu/ml及更低稀释度）基本无检出，PCR法在10-1 CFu/ml菌液稀释度下仍具有检出率，具体见表1。 2.2 定量检测结果比较

在定量检测中，菌液浓度越高，BP平板国家标准法和检测试纸法因为菌落蔓延和菌落密布，按照国家标准和试纸操作说明均无法计数（具体见表2），检测不具有意义。102 CFU/mL菌液稀释度下，BP平板国标法具有检测意义，而检测试纸法仍然无法计数。在低菌液稀释度（10-1 CFU/mL）下，BP平板国家标准法灵敏度低、无检出，而检测试纸法有检出，相比而言具有更高的灵敏度。在101 CFU/mL至100 CFU/mL菌液稀释度，BP平板国标法和检测试纸法均有检出，且计数结果无显著差异。 2.3 其他方面的比较

BP平板国家标准法检验程序相比较而言检验程序较复杂，耗时最长，一般需要2～4 d，当需要快速检测出结果时就较难满足要求。BP平板国家标准法中对检测结果的干扰因素较多，如实验材料（培养基、肠毒素分型试剂盒等）质量、微生物生长环境（温度、湿度、pH等）、杂菌干扰等。同时，会出现受到过热伤害的目的菌在培养基上未生长从而造成的假阴性的情况。但是，BP平板国标法相较而言具有更低的经济成本优势，在不追求检测速度时被广泛地应用。