载体质粒介导的TGF-β1短发夹RNA及TGF-β1反义
RNA对人腹膜纤维化的影响
刘伏友;刘虹;袁芳;彭佑铭;刘映红;段绍斌
【期刊名称】《中华肾脏病杂志》 【年(卷),期】2004(020)002
【摘要】目的研究pcDU6载体质粒介导的转化生长因子β1(TGF-β1)短发夹RNA(shRNA)对体外培养的人腹膜间皮细胞(HPMC)TGF-β1表达的影响,并与TGF-β1反义RNA对HPMC的作用比较.方法针对TGF-β1的以ggcc开始的21碱基大小的片段,分别设计2对寡核苷酸,形成双链后将其依次连入带有U6启动子的pcDNA3.1(-)载体(命名为pcDU6).2.对DNA双链通过BamHI酶切位点连接后形成中间由6碱基序列间隔的反向互补序列,构建成TGF-β1短发夹RNA的产生质粒.并构建反义TGF-β1基因真核表达载体.采用胰蛋白酶消化法从人大网膜组织中分离间皮细胞,建立稳定的体外培养模型.用脂质体转染表达TGF-β1 shRNA的pcDU6载体质粒和表达反义TGF-β1RNA的pcDNA3.1(-)的载体质粒导入高糖(4.25%D-葡萄糖)和细菌脂多糖(LPS)刺激下人腹膜间皮细胞.采用逆转录多聚酶链式反应(RT-PCR)半定量分析HPMC中TGF-β1 mRNA的表达以及纤连蛋白(FN)、Ⅰ型纤溶酶原激活物抑制剂(PAI-1)和胶原Ⅰ(Col Ⅰ)的mRNA表达.采用双抗夹心法酶联免疫吸附实验检测HPMC培养液中TGF-β1蛋白质水平以及FN和PAI-1的蛋白质水平.结果HPMC在高糖和LPS的刺激下可明显上调TGF-β1的表达(P＜0.01).TGF-β1反义RNA转染HPMC 24 h后,与对照组相比,FN、Col Ⅰ、PAI-1 mRNA分别下调17%、26%、9.6%;转染48 h后FN、PAI-1蛋白含量亦明显下降(P＜0.05).pcDU6载体质粒介导的
TGF-β1 shRNA干扰组较GS+LPS组及pcDU6空载体组明显下调TGF-β1的表达(P＜0.01);pcDU6载体质粒介导的TGF-β1 shRNA干扰组间比较并无明显差别(P＞0.05);pcDNA3.1(-)的载体质粒介导的反义RNA组与pcDU6空载体组比较并无明显差别(P＞0.05);pcDU6载体质粒介导的TGF-β1 shRNA干扰组较pcDNA3.1(-)的载体质粒介导的反义RNA组明显下调TGF-β1的表达(P＜0.01).结论pcDU6载体质粒介导的TGF-β1shRNA能够明显抑制高糖和LPS刺激下的HPMC TGF-β1的基因表达,可能是防治CAPD患者腹膜纤维化的一种有效方法.
【总页数】7页(102-108)
【关键词】基因疗法;转化生长因子-β1;腹膜间皮细胞;反义RNA 【作者】刘伏友;刘虹;袁芳;彭佑铭;刘映红;段绍斌
【作者单位】410011,长沙,中南大学湘雅二院肾内科,中南大学肾脏病研究所;410011,长沙,中南大学湘雅二院肾内科,中南大学肾脏病研究所;410011,长沙,中南大学湘雅二院肾内科,中南大学肾脏病研究所;410011,长沙,中南大学湘雅二院肾内科,中南大学肾脏病研究所;410011,长沙,中南大学湘雅二院肾内科,中南大学肾脏病研究所;410011,长沙,中南大学湘雅二院肾内科,中南大学肾脏病研究所
【正文语种】中文 【中图分类】R3 【文献来源】
https://www.zhangqiaokeyan.com/academic-journal-cn_chinese-journal-nephrology_thesis/0201234950372.html
【相关文献】
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载体质粒介导的TGF-β1短发夹RNA及TGF-β1反义RNA对人腹膜纤维化的影响
