早期非小细胞肺癌患者血清miR-494水平改变及临床意义研究

早期非小细胞肺癌患者血清miR-494水平改变及临床意义

研究

赵华谦 陈浩舟 唐红涛

【摘 要】【摘要】 目的 探讨早期非小细胞肺癌(NSCLC)患者血清miR-494水平改变及其临床意义。方法 以2012.1.1-2015.12.31期间符合条件的182例TNM分期I-Ⅱ期NSCLC患者为肺癌组，健康查体志愿者60例为对照组。收集肺癌组的一般临床病理资料。所有研究对象均抽空腹外周静脉血并应用实时定量聚合酶链反应检测miR-494，根据miR-494水平将肺癌组分为低miR-494组(n=89)和高miR-494组(n=93)。所有患者进行前瞻性随访，终点事件为肺癌复发。生存率估算应用Kaplan-Meier法，两条生存曲线之间的比较采用log-rank检验，应用多变量Cox比例风险回归分析miR-494与肺癌术后复发的关系。结果 与对照组相比，肺癌组血清miR-494水平显著升高。与低miR-494组相比，高miR-494组有较高比例的淋巴结转移、Ⅱ期和低分化类型。Kaplan-Meier曲线表明，高miR-494组和低miR-494组无复发生存曲线有显著差异。多变量Cox比例风险回归分析显示，血清miR-494升高是NSCLC术后复发的独立危险因素。结论 NSCLC患者血清miR-494水平升高，是促进肿瘤进展、影响术后复发的危险因素，这对于判断预后和指导治疗具有一定的意义。

【期刊名称】《临床肺科杂志》 【年(卷),期】2019(024)010 【总页数】4

【关键词】【关键词】 非小细胞肺癌；微小RNA；预后

肺癌是发病率及死亡率最高的恶性肿瘤之一，其中非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)占肺癌的80%以上，其五年生存率不足17%[1]。即使是IA期NSCLC，也会有20%～30%患者术后出现复发[2]。因此，有必要进一步探讨NSCLC复发的影响因素。微小RNA(miRNA)是一种高度保守的短单链非编码RNA，在基因调控中具有关键作用，影响各种生物学过程，如细胞增殖、分化等[3]。大量证据表明，miRNA失调参与了NSCLC的生长和转移[4-6]。研究已经发现，miR-494在肺癌组织中异常表达，并与NSCLC预后不良有关[7]。然而，组织化学检测过程繁琐，在监测癌症发展以及实时治疗反应方面有局限性。由于miRNA广泛分布于人体，在人体的血清、尿液、唾液中均有表达[8]，标本容易采集，并可重复测量，已经成为筛查NSCLC和判断预后的一种有前景的生物标志物[9]。在本研究中，我们调查了NSCLC患者血清中miR-494的表达水平，并探讨其与NSCLC临床病理参数和预后的关系。

资料与方法

一、研究对象

以2012.1.1-2015.12.31期间符合条件的182例TNM分期为I-Ⅱ期的早期肺癌患者为肺癌组。纳入标准：(1)NSCLC患者，TNM分期为I-Ⅱ期；(2)行肿瘤所在部位的完全性肺叶或全肺切除术、肺段或楔形切除术联合系统淋巴结清扫术，切缘阴性。合并其他恶性肿瘤、术前行新辅助化疗以及患者和/或家属不愿意参加者排除。其中男性110例，女性72例，平均年龄(64.6±10.8)岁。以同期性别、年龄匹配的健康查体志愿者60例为对照组。其中男性36例，女性24例，平均年龄(63.3±11.9)岁。研究经院伦理委员会批准，研究对象或其家属均知情同意。

二、研究方法 1 一般临床病理资料

记录肺癌组的临床病理资料，包括性别、年龄、吸烟状态、手术方式、肿瘤直径、淋巴结转移、病理学分期、分化程度、病理学类型、胸壁受累情况和术后放化疗情况。

2 外周血miR-494测量

两组研究对象均抽空腹外周静脉血，室温下以2 000 r/min离心10分钟取血清，储存于-80℃超低温冰箱待用。根据说明书使用miRNeasy RNA分离试剂盒(QIAGEN公司，美国加州)从200μL血清中提取miRNAs。使用TaqMan MicroRNA逆转录试剂盒(Applied Biosystems公司，美国加州)合成cDNA。使用miScript SYBR Green PCR试剂盒(QIAGEN公司，美国加州)进行扩增，并在Applied Biosystems 7500实时PCR系统(Applied Biosystems公司，美国加州)上运行实时定量聚合酶链反应。U6作为内参基因，应用2-△△Ct的方法计算所测标本miR-494的相对表达量，各样本重复3次。计算公式：相对表达量=2-△△Ct(△Ct=CtmiR-494-CtU6，△△Ct=△Ct肺癌组-△Ct对照组)。引物设计如下：U6-F，5′-CTCGCTTCGGCAGCACA-3′；U6-R，5′-AACGCTTCACGAATTTGCGT-3′；miR-494-F，5′-TGAAACATACACGGGA-3′；miR-494-R：5′-TATCCAGTGCGTGTCGTGGA-3′。 3 随访

对肺癌组患者进行前瞻性随访，以门诊随访、电话随访为主，辅以住院随访、短信随访、微信随访。随访间歇为 3个月，起点事件为手术，终点事件为肿瘤复发，随访截止日期为2017.12.31。