RNAi CyclinE对肝癌HepG2细胞生长及细胞周期的影响
摘
要
方 法
根据
子 的插 入 序 列进 行 D N A 序 列测 定 ，并 与 设 计 序 列 做 同源 性 比较 。利 用 脂 质 s
体i
LipofectA m ine? 2000 包裹，将 pG FP-V -R S-siC E951、pG FP-V -R S-siC E 1R
1细N2 胞 的 增 殖 ，软 琼 脂 克 隆 形 成 检 测 胞 克 隆 形 成 能
2力 。
A 和结 目 果 标p1. 经 过 同源 性 检 索 和 优 选 确 定 95 1-96 9 位 （G C A A A A G G T T T C A G G G 序GA T ) 、 列 1 122 -114 0 位 (G G A C A A A G C C C G A G C A A A G ) 为 siR N A 靶 序 列2. 的F 筛选 得到重组子 pG FP -V -R S-siC E 95 1 和 pG FP -V -R S-siC E 1122 ，测序分选P 析其 -取
插 入 序 列 与 设 计 完 全 一 致 。 3. V
干 扰 1 组 （转 染 pG F P-V -R S-siC E 95 1 ) 和 干 扰 原
组 （转 染 PG FP -V -R S-siC E 1122 ) 细 胞 cyclin E m R N -设C计的 并合成 相 对 2 表对 达 cyclin E 量 分 基别 因靶 为 向0 .2 15 siR ±0 .N 0A2 1 序 和列 的0 .17 D N 8±0 .0 19 A ，显 著 低 于 空双 链白 发对 卡 照 样 组 D N A 和 无; 关 将siR 其 N 重 A 组 对入 照 siR 组N A （
分 载别 体为 pG FP-0.单406 链V -± R S 0.，037 退 火 ; 得和成重o组子0.372E
pG ±0.042 FP -V , -R S-p<0.siC E 05 951 ) ；在空和 pG 白FP 对照组与无关-V -R S-siC E 1122 siR N A; 对 对照组之重组 间，cyclin 到
n4 . 空 白对 照 组 、 无 关 siR N A 对 照 组 、干 扰 1 组 和 干 扰 2 组 细 胞 在 大约 54K mD
分 处 均 有 免 疫 印 迹 出现 ， 其 中 空 白对 照 组 和 无 关 siR N A 对 照 组 的 免别著 强 于 干 扰 1 组 和 干 扰 2 组 。 5. 转R
细 胞 增 殖 实验 显 示 ，干 扰 1 组 和 干 扰 2 组 与 空 白对 照 组 和 无 关 siR N A 对入 照 人N组
肝 < 0 .0 5 ) 。
6癌A 比
印 迹
T 。2 A
疫 显
摘 耍
性
7. 软 琼 脂 集 落 形 成 能 力 实 验 显 示 ，干 扰 1 组 和 干 扰 2 组 平 均 集 落 形 成 数 为
12 4 .6±16 .3 和 14 1.2士15 .2 ，显 著 低 于 无 关 siR N A 对 照 组 和 空 白对 照 差
组分 别 为 209.2士25.8 和 226.7±34 .2 , p < 0.05 )；空 白对 照 组 与无 关 siR 异 （
Np< 0 .0 5)。
A 结 论
1. cyclin E
对
95 1-969 位
（G C A A A A G G T T T C A G G G T A T ) 、 1 122-1140
位
( G G A C A A A G C C C G A G C A A A G ) 为 靶 区 段 ， 构 建 的 siR N A 照 体 PG FP 载-V -R S-siC E 95 1 和 pG F P -V -R S-siC E l122 ，转 染人肝癌 H epG 细胞 2 能显 著 降低 细胞 cyclin E 基 因 的表 达 ，是理 想 的 siR N A 靶 区段 。 组
2. 抑制 肝癌 H epG 2 细胞 cyclin E 基 因表达 ，可 以使肝癌细 胞 S 和 G 2/M 期细
平胞 比例 减 少 ，G 0/G 1 期细 胞 比例增 加 ，可 以降低 肝癌 H epG 2 的生长速
度 和 均细 胞 软 琼 脂 集 落 形 成 能
力集 。
落
关键词 ：周期蛋 白 E ; 肝癌 ；H epG 2 ，细 胞周 期 ；细 胞增 殖 ；
形成数 比较 ，差异无 显著性
I II
RNAi CyclinE对肝癌HepG2细胞生长及细胞周期的影响
