pEGFP-N1-TNFα表达载体的构建与鉴定

p EGFP－N1－TNFα表达载体的构建与鉴定

任艳鑫，赵留芳，杨 洁，孙瑞梅，王 虎，李晓江，隋 军

【摘 要】目的 构建p EGFP－N1－TNFα重组质粒并鉴定，为转导CIK细胞并定位表达奠定基础。方法 以p MD19 Si mple T－TNFα为模板，PCR扩增TNFαCDS区片段，将PCR产物进行15 g／L琼脂糖凝胶电泳，并回收TNFα条带，用BglⅡ和Hin dⅢ将TNFα的PCR片段及目的载体p EGFP－N1双酶切，然后进行连接。连接产物转化至DH5α中。挑取克隆，提质粒，进行鉴定。结果 PCR扩增片段、双酶切出现722 bp大小的目的基因条带与预期结果相符；插入片断测序结果与合成的寡核苷酸序列一致。结论 成功构建了重组质粒p EGFP－N1－TNFα，为下一步用纳米材料转染CIK细胞的研究奠定了基础。 【期刊名称】西安交通大学学报（医学版） 【年(卷),期】2013(034)002 【总页数】4

【关键词】肿瘤坏死因子；真核表达载体；质粒p EGFP－N1；基因疗法；CIK细胞

TNF－α是迄今发现的抗肿瘤活性最强的细胞因子，对体外多种肿瘤细胞株有明显的细胞毒性。TNF－α可以促进肿瘤组织微血管损伤和抑制肿瘤血管形成，从而引起肿瘤组织出血、坏死，并通过多种机制促进肿瘤侵袭和转移［1］。 本研究旨在构建以GFP为报告基因的重组表达质粒p EGFP－N1－TNFα，为下一步转染人鼻咽癌CIK细胞，检测转染后CIK细胞分泌TNFα能力、细胞存活周期、CIK细胞杀瘤活性等指标，寻找提高CIK细胞功能的有效方法，为进一步改善鼻咽癌患者免疫抑制状态奠定基础。