实验三 多糖的实验
[实验目的及要求]
1．熟悉淀粉多糖的碘试验反应原理和方法。 2．进一步了解淀粉的水解过程。 [实验原理]
淀粉广泛分布于植物界，谷、果实、种子、块茎中含量丰富，工业用的淀粉主要来源于玉米、山芋、马铃薯。本实验以马铃薯为原料，利用淀粉不溶或难溶于水的性质来制备淀粉。
淀粉遇碘呈蓝色，是由于碘被吸附在淀粉上，形成复合物，此复合物不稳定，极易被醇、氢氧化钠和加热等使颜色褪去，其他多糖与碘呈特异的颜色，此类呈色物质极不稳定。
淀粉在酸催化下加热，逐步水解成分子较小的糖，最后水解成葡萄糖。 [实验仪器及用品]
器材：研钵、布氏漏斗、抽滤瓶、表面皿、白瓷板、胶头滴管、电炉、石棉网、纱布、试管、烧杯、吸管、量筒、试管夹。
试剂：碘化钾、碘、淀粉、氢氧化钠、本尼迪试剂，浓硫酸、碳酸钠。 [实验内容及步骤]
一、马铃薯淀粉的制备
将马铃薯去皮，在研钵中充分研碎，加水混合，用纱布过滤，除去粗颗粒，滤液中的淀粉很快沉到底部，多次用水洗淀粉，抽滤，滤饼放在表面皿上，在空气干燥中即得。
二、淀粉与碘的反应
1．置少量自制淀粉于白瓷板上，加1-3滴稀碘液（配制2%碘化钾溶液，加入适量碘，使溶液呈淡黄棕色即可），观察颜色变化。
2．取试管1支，加0.1%淀粉5 ml，再加2滴稀碘液，摇匀后，观察其颜色变化。将管内液体分成3份，其中1份加热，观察颜色是否褪去。冷却后，颜色是否全部恢复。另2份加入乙醇或10%NaOH溶液，观察颜色变化并解释之。
三、淀粉的水解反应
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在一小烧杯中加入1%淀粉溶液25 ml及20%硫酸1 ml，放在石棉网上小火加热，微沸后每隔两分钟取出反应液2滴置于白瓷板上做碘试验。与此同时另取反应液三滴，用10%碳酸钠中和后，做本尼迪试验，记录试验结果并解释之。
实验四 糖的旋光性和变旋现象
[实验目的及要求]
1．了解糖的变旋现象，掌握用糖的旋光性测定糖浓度的方法。 2．学会使用旋光仪。 [实验原理]
光是一种电磁波，光波振动的方向与光的前进方向垂直。普通光的光波在各个不同的方向上振动。但如果让它通过一个尼科尔(Nicol)棱镜（用冰洲石制成的棱镜），则透过棱镜的光就只在一个方向（偏振面）上振动，这种光就叫做平面偏振光。偏振光能完全通过晶轴与其偏振面平行的尼科尔棱镜，而不能通过晶轴与其偏振面垂直的尼科尔棱镜。
当平面偏振光通过某种介质时，有的介质对偏振光没有作用，即透过介质的偏振光的偏振面保持不变。而有的介质却能使偏振光的偏振面发生旋转。这种能旋转偏振光的偏振面的性质叫做旋光性。具有旋光性的物质叫做旋光性物质或光活性物质。具有不对称结构的手性化合物都有旋光性。
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能使偏振光的偏振面向右旋的物质，叫做右旋物质；反之，叫做左旋物质。通常用\（拉丁文dextro的缩写，\右\的意思）或\表示右旋；用\（拉丁文laevo的缩写，\左\的意思）或\表示左旋。偏振光的偏振面被旋光物质所旋转的角度，叫做旋光度，用\α\表示。
旋光度的大小不仅取决于物质的本性，还与溶液的浓度、液层的厚度、光的波长、测定温度以及溶剂的性质等等有关。
偏振光通过厚度为1dm，浓度含有1g/ml的待测物质的溶液所测得的旋光度称为比旋光度[α]，它是物质的一个特性常数，如下式所示：
[α]λ=α/cl
式中 t：测定时的温度；
λ：测定时所用光源的波长； α：实测的旋光度； c：溶液的浓度（g/ml）； l：玻管的长度（dm）。
一个有旋光性的溶液放置后其比旋光度改变的现象称为变旋。变旋的原因是糖从α-型变为β-型或由β-型变为α-型。一切单糖都有变旋现象。无α-，β-型的糖类即无变旋性。 [实验仪器及用品]
仪器：旋光仪、电子天平。 器皿：容量瓶、烧杯、玻棒。
试剂：未知浓度的蔗糖溶液、10%葡萄糖溶液。 [实验内容及步骤]
一、利用糖的旋光性测定糖的浓度
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1．转开样品管螺母，洗净玻管，然后向管中注满蒸馏水，盖上玻片，注意管中不能有气泡，玻片上的水渍必须擦干。
2．把样品放入旋光仪内，打开电源，待钠光源稳定1-2min后，转动刻度盘，使目镜中两半圆的亮度相等，记下刻度盘的读书，以此为零点。
3．用蔗糖代替蒸馏水测其旋光度，并按公式计算出蔗糖的浓度。 二、糖的变旋现象
用新配制的10%葡萄糖溶液按上法测其旋光度并计算比旋光度，以后每隔2h测定其旋光度，计算比旋光度直至比旋光度不再改变，说明α-，β-型互变已达平衡。
实验五 血糖的定量测定（葡萄糖氧化酶法）
[实验目的及要求]
掌握葡萄糖氧化酶法测定血糖含量的原理和方法。 [实验原理]
D-葡糖糖
H2O2+4-AAP+苯酚 POD [实验仪器及试剂]
试管、移液管、UNICO-2000型分光光度计、恒温水浴锅。
酶试剂：葡萄糖氧化酶（GOD）、过氧化物酶（POD）、4-氨基安替吡啉（4-AAP）。 酚试剂：苯酚。
标准葡萄糖溶液：100 mg/dL (5.55 mmol/L)。 [实验步骤]
按下表加入各反应物：
加入物（ml） 葡萄糖标准液 血清样品 酶试剂 酚试剂 空白管 —— —— 1.50 1.50 标准管 0.020 —— 1.50 1.50 测定管 _____ 0.020 1.50 1.50 GOD
D-葡萄糖酸+ H2O2
红色醌化物+H2O
混匀，37℃保温15min，以空白管调零，505nm波长处测定各管吸光度值。
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计算 血糖含量=A样/A标×标准溶液浓度 [实验注意事项]
1. 分离血清要求使用未溶血样品，否则测定结果偏大。 2. 要求在30 min内分离血清，糖酵解在全血中以7%/h进行。 3. 样本在4℃-8℃可稳定24h,样本放置时间过长会使结果偏低。
实验六 人血清中总胆固醇的测定
[实验目的及要求]
学会利用氧化酶法测定血清中总胆固醇含量的原理和方法。 [实验原理]
胆固醇脂+H2O 胆固醇+游离脂肪酸
CEH
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胆固醇+O2 ⊿-胆甾烯酮+H2O2 CHOD POD 醌亚胺（红色）+4H2O 2H2O2+4-AA+4-氯仿 CEH：胆固醇脂酶 POD：过氧化物酶 CHOD：胆固醇氧化酶 4-AA：4-氨基安替吡啉
醌亚胺在500nm有特征吸收，且生成量与样本中的胆固醇含量成正比，可通过测定标准品反应生成的醌亚胺的吸光度值，计算出样本中胆固醇的浓度。 [实验仪器及试剂]
试管、移液管、UNICO-2000型分光光度计、恒温水浴锅。 标准血清、样本血清、蒸馏水、酶试剂盒。 [实验步骤]
按下表加入各反应物：
l 酶试剂
空白管 标准管 样本管 2000 8
2000 2000
生物化学实验教案(全)
