08中药一班E组 柴胡总皂苷的提取
柴胡总皂苷的提取及质量评价方案
一、 实验目的
1.掌握柴胡中总皂苷的提取分离方法及操作 2.熟悉三萜皂苷类化合物的检识及鉴定方法
二、 实验原理
三萜皂苷类，由于糖分子的引入，使极性增大，可溶于水，易溶于热水、稀醇、热甲醇和热乙醇中，几乎不溶于或难溶于丙酮、乙醚以及石油醚等极性小的有机溶剂。
柴胡皂苷在水饱和的正丁醇中溶解度较大，且可以与水分成二相，可利用此性质从水溶液中用正丁醇提取皂苷，借以与亲水性的糖、蛋白质等分离。此外为避免原生苷环氧醚键的断裂，防止皂苷次生化，可在提取溶剂中加入5%吡啶。
三、 实验仪器：
圆底烧瓶、球形冷凝管、电炉、铁架台、抽滤装置、蒸馏装置、分液漏斗、减压蒸馏装置、烧杯、玻棒、量筒、紫外分光光度计
四、 实验材料：
柴胡药材、95%乙醇、水饱和正丁醇、乙醚、乙酸酐、浓硫酸：乙酸酐（1：20）、5%α-萘酚乙醇液、0.9%生理盐水、2%的红细胞悬浮液、柴胡皂苷a、柴胡皂苷d、乙酸乙酯-乙醇-水（8：2：1）、2﹪对二甲氨基苯甲醛的40﹪硫酸溶液、沸石、
五、 实验步骤：
? 提取：
1.取柴胡药材30g，加入到圆底烧瓶中，再加入95%乙醇溶液240ml，水浴加热回流1h，抽滤，滤液备用。取滤渣再加入95%乙醇溶液180ml，水浴加热回流0.5h，抽滤，合并两次滤液。
2.将合并的滤液水浴加热回流至100ml,加100ml水搅拌，抽滤。 3.取滤液，用1800ml水饱和正丁醇分两次萃取，取上层液。 4.层液减压蒸馏至基本无液体流出，回收正丁醇。 5.乙醚洗涤，洗涤完全后抽滤，沉淀即为总皂苷。
? 定性检识 1.泡沫实验
取柴胡总皂苷样品适量，加水5ml溶解，强烈振摇，产生持久性泡
泡沫。
2.显色反应
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08中药一班E组 柴胡总皂苷的提取
Liebermann-Burchard：取柴胡总皂苷样品适量，加乙酸酐1ml溶解，加浓硫酸-乙酸酐（1:20）数滴产生黄、红、紫、蓝颜色变化，最后褪色。 Molish反应 ：取柴胡总皂苷样品适量，加乙醇1ml溶解，加5%α-萘酚乙醇液1-3滴，摇匀后沿试管壁缓缓加入浓硫酸，在两液面间产生紫色光环。
3.溶血实验
取柴胡总皂苷样品适量，加0.9%生理盐水溶解，加几滴2%的红细胞悬浮液，溶液由混浊变澄明，发生溶血现象。
4.薄层色谱检识：
薄层板：硅胶G-CMC-Na板
对照品：柴胡皂苷a、柴胡皂苷d
展开剂：乙酸乙酯-乙醇-水（8：2：1）
显色剂：2﹪对二甲氨基苯甲醛的40﹪硫酸溶液
对照品的制备：精密称取柴胡皂苷a对照品适量,用甲醇制成每毫升含
0.5mg的溶液,作为对照品溶液a。精密称取柴胡皂苷d对照品适量，用甲醇制成每毫升含0. 5 m g的溶液, 作为对照品溶液。
样品的制备：取柴胡总皂苷样品少量用甲醇溶解作为供试品。
薄层层析: 照薄层色谱法实验, 吸取上述各种溶液各5μl，分别于同一
以羧甲基纤维钠为粘合剂的硅胶G薄层板上, 以醋酸乙酯- 乙醇- 水( 8： 2：1)为展开剂展开, 取出, 晾干, 喷以2% 对二甲氨基苯甲醛的40%硫酸溶液, 在60 ℃加热至斑点显色清晰，置日光及紫外光灯(365nm)下检识。
观察记录：记录图谱并计算Rf值。
? 含量测定
1．紫外分光光度法
（1）仪器：紫外分光光度计，检测波长536nm （2）对照品的制备：精密称取柴胡皂苷d对照品适量,加甲醇制成每1ml
含2mg的溶液, 摇匀, 即得。 （3）共试品的制备：
（4）制备: 精密吸取对照品溶液0.1、0.2、0.4、0.6、0. 8、1.0ml 置
25ml具塞比色管中, 加甲醇至1ml，分别精密加入0.1%对二甲氨基苯甲醛乙醇溶液1ml摇匀, 于700C反应10min, 取出, 放冷, 加入磷酸5.0ml 700C反应30min, 取出, 放冷, 于536nm 处测定吸收度。以吸收度值A为纵坐标,柴胡皂苷d的浓度(mg /L)为横坐标, 绘制标准曲线。
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中药化学实验方案设计(柴胡)
