（1）对甲类传染病和肺炭疽、艾滋病等乙类传染病必须在当地疾病控制机构的监督指导下，由有关单位和个人及时进行消毒处理，或由当地疾病控制机构负责进行终末消毒。
（2）对乙类传染病中的病毒性肝炎、细菌性痢疾、伤寒和副伤寒、脊髓灰质炎、白喉、布鲁菌病、炭疽、钩端螺旋体病、流行性出血热、淋病、梅毒等和丙类传染病中肺结核，必须按照当地疾病控制机构提出的卫生要求，由病人陪护人或所在单位进行消毒处理或由当地疾病控制机构组织进行消毒处理。
（3）对丙类传染病中的急性出血性结膜炎、感染性腹泻等由病人或其陪伴进行消毒处理。
（4）各类传染病(包括非法定传染病)爆发流行时应在当地疾病控制机构的监督指导下，由有关单位及时进行消毒，或由当地疾病控制机构负责对进行消毒处理。
（5）在医院中对传染病病人的终末消毒由医院安排专职人员进行。 （6）非专业消毒人员开展疫源地消毒前应接受培训。 1.4.5.2 时限要求
接到甲类传染病疫情报告和乙类传染病中的肺炭疽和艾滋病的疫情报告后，城市应在6 h内，农村应在12 h内采取消毒措施，其他传染病按病种不同应在24h至48h内采取消毒措施。
1.4.5.3 装备要求
承担疫源地消毒任务的单位，应根据工作需要和条件配备消毒工具和防护用品，储备一定数量的消毒剂。
(1)消毒工具：背负式喷雾器，气溶胶喷雾器，担架式机动喷雾器，背负式机动喷雾器、 配药桶（10 L）、刻度量杯（筒）、工具箱、消毒车。
(2)防护用品：工作服、隔离服、防护眼镜、口罩、防鼠疫口罩、帽子、手套、长筒胶靴、毛巾、污物袋、手电筒、皮卷尺、雨衣、长柄毛刷、装工作衣的布袋（30cm×30cm×40cm）、肥皂盒、皮肤消毒盒（瓶）。
(3)消毒剂：储备一定量的消毒剂并与有关厂家建立联系，确保处理突发疫情的需要。常用消毒剂有过氧乙酸、含氯消毒剂、碘伏等。 1.4.5.4 技术要求
(1)疫区消毒
1)消毒范围和对象：以传染病排出病原体可能污染的范围为依据确定消毒范围和对象。 2)消毒持续时间：以传染病流行情况和病原体监测结果为依据确定消毒的持续时间。 3)消毒方法的选择：以消毒因子的性能、消毒对象、病原体种类为依据选择消毒方法。尽量避免破坏消毒对象的使用价值和造成环境的污染。
4)疑似传染病疫源地的消毒：可按疑似的该类传染病疫源地进行消毒处理或按下一条进行处理。
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5)不明传染病疫源地的消毒：应根据流行病学指征确定消毒范围和对象，采取最严格的消毒方法进行处理。
6)注意与其它传染病控制措施配合：搞好传染源的管理，疫区的封锁、隔离，杀蝇、防蝇，灭鼠、防鼠，灭蚤，搞好饮用水、污水、食品的消毒及卫生管理，搞好环境卫生。加强易感人群的保护。
7)填报消毒工作记录，必要时进行消毒效果评价。 (2)疫点的随时消毒
1)对病人应根据病情做到“三分开”与“六消毒”。“三分开”是指：①分住室（条件不具备可用布帘隔开，至少要分床）；②分饮食；③分生活用具（包括餐具、洗漱用具、便盆、痰罐等）。“六消毒”是指：①消毒分泌或排泄物（如呼吸道传染病主要为口鼻分泌物，肠道传染病主要为粪便，接触性传染病主要为脓液、痂皮等）；②消毒生活用具；③消毒双手；④消毒衣服、被单；⑤消毒患者居室；⑥消毒生活污水、污物。
2)病人陪伴和护理人员，除做好病人的随时消毒外，应做好本人的卫生防护，护理病人
后，应消毒双手。
(3)疫点的终末消毒程序
1)在出发前，应检查所需消毒用具、消毒剂和防护用品，做好准备工作。
2)消毒人员到达疫点，首先查对门牌号和病人姓名，并向有关人员说明来意，做好防疫知识宣传，禁止无关人员进入消毒区域内。
3)对脱掉外衣应放在自带的布袋中（不要放在污染或可能受到污染的地方）。穿隔离服、胶鞋，戴上口罩、帽子。用过氧乙酸或含氯制剂时，须戴防护眼镜。
4)仔细了解病员患病前和患病期间居住的房间、活动场所，用过的物品、家具，吐泻物、污染物倾倒或存放地点，以及污水排放处等，据此确定消毒范围和消毒对象。根据消毒对象及其污染情况，选择适宜的消毒方法。
5)进入疫点时，应先消毒有关通道（见4.4.2）。
6)测量房屋、家具及地面需消毒的面积和体积，估算需消毒的污水量。 7)必要时，由检验人员对不同消毒对象进行消毒前采样。
8)消毒前应关闭门窗，将水缸盖好，将未被污染的贵重衣物、饮食类物品、名贵字画及陈列物品收藏好。
9)如系呼吸道传染病，应对室内空气进行消毒（见4.4.1）。 10)如系肠道传染病，应先于室内灭蝇，再进行消毒。
11)对室内地面、墙壁、家具和陈设物品消毒时，应按照先上后下，先左后右的方法，依次进行消毒（见4.4.1）。
12)病人用过的餐（饮）具、污染的衣物若不能集中在消毒站消毒时，可在疫点进行煮沸、浸泡或擦拭消毒。 作浸泡消毒时，必须使消毒液浸透被消毒物品。作擦拭消毒时，必须反复擦拭2次～3次[见（4.4.3）、（4.4.5）]。对污染重、经济价值不大的物品和废弃物，
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在征得病家同意后焚烧。
13)室内消毒后，必要时对厕所、垃圾、下水道口、自来水龙头、缸水和井水等进行消毒[见（4.4.14）、（4.4.15）、（4.5.1）、（4.5.3）]。
14)对传染源密切接触者进行人员卫生处理。
15)疫点消毒工作完毕，对消毒人员穿着的工作服、胶靴等进行喷洒消毒后脱下。将衣物污染面向内卷在一起，放在布袋中带回消毒。所用消毒工具表面用消毒剂进行擦洗消毒。
16) 必要时，到达规定的消毒作用时间后，由检验人员对不同消毒对象进行消毒后采样。 17)填写疫点终末消毒工作记录（见疫源地消毒技术规范，附录1）。 18)离开病家前，让病家开窗通风，擦拭打扫。 (4)消毒人员注意事项
1）出发前，要检查应携带的消毒工具是否齐全无故障，消毒剂是否足够。
2） 应主动取得病家合作和相关人员的配合。选择消毒因子时，应尽量采用物理法消毒。在用化学法消毒时应尽量选择对相应致病微生物杀灭作用良好，对人、畜安全，对物品损害轻微，对环境影响小的消毒剂。
3）消毒过程中，不得吸烟、饮食。要注意自我保护，既要防止或减少受到消毒因子的伤害又要避免受到微生物感染。
4)消毒过程中，不得随便走出消毒区域，禁止无关人员进入消毒区内。
5)消毒应有条不紊，突出重点。凡应消毒的物品，不得遗漏。严格区分已消毒和未消毒的物品，勿使已消毒的物品被再次污染。
6)携回的污染衣物应立即分类作最终消毒。 7)清点所消耗的药品器材，加以整修、补充。 8)填好的消毒记录应及时上报。
2 消毒检验技术规范
2.1 消毒检验技术规范
2.1.1 消毒剂杀微生物试验技术 2.1.1.1 适用范围
本章内容主要适用于消毒剂鉴定和日常监测，用来评价各种用途的消毒剂对微生物的杀灭效果。按此方法进行的试验，只是对消毒剂的杀菌能力的重要方面进行验证，侧重反映消毒剂
的实用剂量与杀菌能力。不能反映消毒剂的全面特性。
2.1.1.2 菌悬液与菌片的制备 2.1.1.2.1 适用范围
制备消毒剂杀菌试验用细菌悬液与菌片，以供消毒剂杀菌试验时使用。 2.1.1.2.2 试验器材
（1）菌种:金黄色葡萄球菌ATCC 6538，作为细菌繁殖体中化脓菌的代表；绿脓杆菌ATCC 15442，作为医院感染中最常分离的细菌繁殖体的代表；大肠杆菌8099，作为细菌繁殖体中肠道菌的代表；枯草杆菌黑色变种ATCC 9372，以其芽孢作为细菌芽孢的代表；龟分枝杆菌脓肿亚种ATCC 93326，作为人结核分枝杆菌的代表；白色葡萄球菌8032作为空气中细菌的代
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表。在上述规定的菌株基础上，根据消毒剂特定用途或试验特殊需要，还可增选其他菌株。
（2）有机干扰物：见附录A。 （3）磷酸盐缓冲液：见附录A。 （4）无菌蒸馏水。
（5）稀释液：见附录A。
（6）细菌培养基：胰蛋白胨大豆琼脂培养基（TSA），胰蛋白胨大豆肉汤培养基（TSB）等，见附录A。
（7）革兰染色液：见附录A。 （8）芽孢染色液：见附录A。 （9）恒温水浴箱。 （10）玻璃漏斗。
（11）刻度吸管（1.0ml、5.0ml、10.0ml），毛细吸管。
（12）数字可调移液器（10μl, 20μl, 100μl,200μl,1000μl）及配套用一次性塑料吸头。
（13）离心机。 （14）电动混合器 （15）浊度计。
2.1.1.2.3 细菌悬液制备程序
（1） 细菌繁殖体悬液的制备
1）取冻干菌种管，在无菌操作下打开，以毛细吸管加入适量营养肉汤，轻柔吹吸数次，使菌种融化分散。取含 5.0 ml～10.0ml 营养肉汤培养基试管，滴入少许菌种悬液，置 37 ℃ 培养18h～24h。 用接种环取第 1 代培养的菌悬液，划线接种于营养琼脂培养基平板上，于 37℃ 培养 18h～24h。挑取上述第 2 代培养物中典型菌落，接种于营养琼脂斜面，于 37℃ 培养 18h～24h，即为第3 代培养物。
2）取菌种第 3代～14 代的营养琼脂培养基斜面新鲜培养物（18h～24h），用 5.0ml 吸管吸取 3.0 ml～5.0ml 稀释液加入斜面试管内，反复吹吸，洗下菌苔。随后，用 5.0ml 吸管将洗液移至另一无菌试管中，用电动混合器混合（振荡）20s，或在手掌上振敲 80 次，以使细菌悬浮均匀。
3）初步制成的菌悬液，先用细菌浓度比浊测定法粗测其含菌浓度，然后以稀释液稀释至所需使用的浓度。
4）细菌繁殖体悬液应保存在 4℃ 冰箱内备用。应当天使用不得过夜。 5）怀疑有污染时，应以菌落形态、革兰染色与生化试验等法进行鉴定。 （2）细菌芽孢悬液的制备
1）取冻干菌种管，在无菌操作下打开，以毛细吸管吸加适量营养肉汤培养基，轻柔吹吸数次，使菌种融化分散。取含 5 ml～10ml 营养肉汤培养基试管，滴入少许菌种悬液，置 37℃ 培养 18h～24h。用接种环取第 1 代培养的菌悬液，划线接种于营养琼脂培养基平板上，于 37℃ 培养 18h～24h。挑取上述第 2 代培养物中典型菌落，接种于营养肉汤培养基，于 37℃ 培养 18h～24h，即为第 3 代培养物。
2）用 5.0ml 吸管吸取 5.0 ml～10.0ml 第 3代～5代的 18h～24h 营养肉汤培养物，接种于罗氏瓶中营养琼脂培养基表面，将其摇动使菌液布满营养琼脂培养基的表面，再将多余肉汤培养物吸出，置于37℃ 温箱内，培养 5d～7d。
3）用接种环取菌样少许涂于玻片上，固定后以改良芽孢染色法染色，并在显微镜（油镜）下进行镜检。当芽孢形成率达 95% 以上时，即可进行以下处理。否则，可再在室温下放置一定时间，直至达到上述芽孢形成率后再进行以下处理。
改良芽孢染色法：①用接种环取菌样涂布于玻片上，待自然干燥。而后通过火焰加热将菌固定于玻片上。②将涂片放入平皿内，片上放两层滤纸，滴加足量的 5.0% 孔雀绿水溶液。将平皿盖好，放54℃～56℃ 条件下，加热 30min。取出，去滤纸，用自来水冲洗残留孔雀绿溶液。③加0.5% 沙黄水溶液，染1min。水洗，待干后镜检。芽孢呈绿色，菌体呈红色。
4）罗氏瓶培养物，用 10.0ml 吸管加 10.0ml 无菌蒸馏水于每一罗氏瓶中，以 L 棒轻轻推刮下菌苔。 吸出第一批洗下的菌悬液，再向瓶内吸加 5.0ml 无菌蒸馏水，重复洗菌一遍。将第一和第二批洗下的菌悬液集中于一含玻璃珠的无菌三角烧瓶中，振摇5min，打碎菌
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块，使成均匀的芽孢悬液。
5）必要时，将盛装菌悬液的三角烧瓶置 45℃ 水浴中 24h，使菌自溶断链，分散成单个芽孢。
6）用无菌棉花或纱布过滤芽孢悬液，清除其中的琼脂凝块。
7）将过滤后的芽孢悬液，置无菌离心管内，以 3000 r/min 速度离心 30min。弃上清液，加蒸馏水吹吸使芽孢重新悬浮。 再离心和重新悬浮清洗，先后共 3 遍。
8）将洗净的芽孢悬浮于三角烧瓶内蒸馏水中，并加入适量小玻璃珠。
9）将芽孢液放于 80℃ 水浴中 10min（或 60℃，30min），以杀灭残余的细菌繁殖体。 待冷至室温后，保存于 4℃ 冰箱中备用。有效使用期为半年。
10）芽孢悬液在使用时，应先进行活菌培养计数。
11）怀疑有杂菌污染时，应以菌落形态、革兰染色与生化试验等法进行鉴定。 2.1.1.2.4 菌片的制备程序
（1）消毒试验中使用的菌片是以菌液滴加于载体上制成。载体应根据消毒对象选择，常用的有金属、玻璃、滤纸、线、布等等。根据其特点选择适宜材料载体作为代表。载体可以为方形，大小为 10mm×10mm。 当以金属片为载体时，因方形金属载体在振敲时可将玻璃试管撞碎，故改用 12mm 直径圆形金属片（厚 0.5mm）。
（2）所用载体（除滤纸片外）于染菌前，应进行脱脂处理。脱脂方法如下：①将载体放在含肥皂的水中煮沸30 min；②而后以自来水洗净；③用蒸馏水煮沸 10min；④用蒸馏水漂洗至 pH 呈中性；⑤晾干（或熨平）备用。
（3）布片统一用白平纹棉布制作。在剪开前，先将脱脂的布块按载体规定的大小，抽去边缘一周的经纬纱各一根，再按抽纱痕剪开。此法制成的载体大小一致，且无毛边。金属片以不锈钢制作，纸片以新华滤纸制作。
（4）载体经压力蒸汽灭菌后，统一使用滴染法。
染菌用菌悬液：使用TSB营养肉汤配制。细菌繁殖体，可直接使用经18～24h培养的斜面
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培养物，细菌芽孢可使用4℃冰箱贮存液。含菌量约为1×10cfu/ml～5×10cfu/ml，可使用浊度计调整菌液浓度。
滴染法染菌时，将经灭菌的载体片平铺于无菌平皿内，逐片滴加菌液。菌液滴加量每片为10μl。用10μl移液器接灭菌塑料吸头，滴染菌液，并用接种环涂匀整个载体表面。滴染菌液后，染菌载体可置37℃温箱内烤干（约20min～30min），或置室温下自然阴干后再使用。注意细菌繁殖体在烤干过程中，可引起部分死亡，如绿脓杆菌在37℃烤干过程中，滴度最高可下降1个对数值。此时，应提高初始菌浓度，以便达到所需的菌量。
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（5）每个菌片的染菌量，即回收菌数，按活菌培养计数所得结果，应为 5×10 cfu/
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片～5×10 cfu/片。 2.1.1.2.5 注意事项
（1）用浊度计测定的菌悬液浓度，只用于在滴染菌片时对菌悬液稀释度的估计。作为菌悬液含菌浓度或菌片染菌量的正式报告（如杀菌试验中阳性对照组菌悬液或菌片所含菌量），必须以活菌培养计数的实测结果为准，不得使用根据比浊法判定的估计值。
（2）制得的菌悬液和菌片，用毕应随时放入冰箱内，尽量减少在室温下放置时间，以免增加细菌的自然死亡。
（3）滴染时，菌液滴加量不宜过多，避免流散影响染菌的准确性。
（4）配制菌悬液和制备菌片时，保持环境的洁净和安静，严格按无菌要求操作，以防污染杂菌，影响随后杀菌试验的结果。
（5）用带橡皮塞的容器保存菌液时，应将其预先煮沸10min 进行脱硫处理。 2.1.1.3 活菌培养计数技术 2.1.1.3.1 适用范围
测定细菌悬液、菌片、采样液等样本中含有活菌的数量。 2.1.1.3.2 试验器材
（1）刻度吸管（1.0ml、5.0ml）。 （2）稀释液：见附录A。
（3）营养琼脂培养基：见附录A。 （4）电动混合器
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消毒技术规范
