流式细胞术检测血小板膜糖蛋白与血栓性疾病变化关系研
究
王朝辉1，鞠文博2
【摘 要】摘要：目的 探讨血栓性疾病(包括脑血栓、心肌梗死和深静脉血栓)患者血小板活化因子(检测CD62p的变化)与急性血栓性疾病的关系.方法 选取脑血栓、心肌梗死和深静脉血栓患者各50例为观察组，同期20名健康体检者为对照组，采用流式细胞术进行血小板活化标志物CD62p的检测.结果 血栓性疾病(脑血栓、心肌梗死和深静脉血栓)患者治疗前后血小板活化程度较正常人高；治疗前CD62p表达率较治疗后及对照组明显升高，治疗后CD62p仍高于对照组.结论 血小板活化因子CD62p在血栓性疾病患者中变化明显，可作为血栓性疾病患者治疗及预后的动态监测指标. 【期刊名称】北华大学学报（自然科学版） 【年(卷),期】2013(014)005 【总页数】4
【关键词】脑血栓；心肌梗死；深静脉血栓；CD62p；流式细胞术
血栓性疾病包括脑血栓、心肌梗死和深静脉血栓，发病率很高，是人类致残、致死的重要因素.血小板的主要功能就是参与血栓形成，该功能的实现是通过其表面的膜糖蛋白来完成的，血小板膜表面糖蛋白包括血小板质膜糖蛋白和颗粒膜糖蛋白，较重要的血小板质膜糖蛋白有CD41，CD61，CD42a，CD42b，CD36[1].在正常情况下，血小板胞膜与溶酶体膜融合成为活化血小板，血小板表面有CD62p，CD63表达，其黏附、聚集功能很强[2].各种因子的作用使静息状态下血小板膜糖蛋白迅速发生数量重排和构型变化，与血浆中相应物质结
合而使血小板聚集，同时血小板内发生各种分泌反应也促进了血栓的形成.这些糖蛋白主要包括CD62p，CD42b，GPⅡb/Ⅲa等，其表达多少，直接反映血小板功能状态.为了确定这些指标的阳性预测值，应用流式细胞术检测血小板膜糖蛋白，主要检测CD62p，CD42b，GPⅡb/Ⅲa等指标，探讨其在血栓疾病中诊断、治疗和预后判断的意义.
1 标本及主要仪器试剂
1.1 对 象
北华大学附属医院神经科2011年2月～2011年12月血栓性疾病患者150例(脑血栓、心肌梗死、深静脉血栓各50例)，其中，男100例，女50例，年龄52～78岁，平均(68±7.2)岁.检测时间设定：治疗前、治疗后2，4，8周，经临床、心电图、心肌酶学检测符合血栓的诊断标准.门诊健康查体20例为对照组，其中，男14例，女6例，年龄50～72岁，平均(64±3.9)岁.体检正常，既往无冠心病、心脑血管、高血压、糖尿病等病史，近期无手术或创伤、感染、血液系统疾病、肿瘤及免疫性疾病.测定前两周内未服用任何影响血小板功能的药物.
1.2 主要试剂和仪器
主要试剂：FITC(异硫氰酸荧光素)、PE(藻红蛋白)、PBS磷酸盐缓冲液 (德国医学实验诊断有限公司)；CD61PeCrP(多甲藻素-叶绿素蛋白标记的抗血小板膜糖蛋白GPllla的单克隆抗体)(美国Beetondickion公司)；多聚甲醛(天津科密化学试剂
开发中心).主要仪器：CTAD真空采血、Beckman Coulter XL型流式细胞仪、Falocn上样管(美国Bectondiekion公司)；KX-21型血细胞分析仪(日本
Sysmxe公司).
2 实验方法
2.1 流式细胞仪检测方法 2.1.1 样品处理
取1.8 mL静脉血，置于含0.2 mL 3.8%枸橼酸钠抗凝剂离心管中，摇动混匀.800 r/min离心5 min，分离得到含较多血小板的血浆，后加入等量2%多聚甲醛固定15 min，用PBS-EDTA缓冲液悬浮血小板后洗涤2次，1 000 r/min离心15 min，血小板悬浮于PBS-EDTA缓冲液中，调节血小板浓度至1010个/L. 2.1.2 样品检测
在含有荧光染色剂试管中加入患者血小板100 μL，同时将异硫氰酸荧光素(FITC)标记的抗CD42b抗体及藻红蛋白(PE)标记的抗CD62p抗体各20 μL混匀，室温下避光保存30 min，PBS洗涤两次，每次1 000 r/min离心15 min，用0.5 mL PBS悬浮并转移到流式细胞仪，上机检测. 2.1.3 流式细胞仪
检测和数据分析前向角和侧向角均采用对数放大，每份样品收集20 000个血小板，记录其荧光标记抗体的阳性百分比.Cellquest软件分析计算CD42b，CD62p的阳性表达率. 2.2 统计方法
所有数据用SPSS 14软件计算，方差分析比较各组间的差异，计量资料以均数±标准差表示，采用t检验进行比较.
3 结 果
流式细胞术检测血小板膜糖蛋白与血栓性疾病变化关系研究
