原核生物基因表达调控的特点：
1. 2. 3. 4.
原核生物基因表达以操纵子为单位。 原核生物只有一种RNA聚合酶。
原核生物无核膜，转录和翻译过程是偶联的。
原核生物基因一般不含内含子，在原核细胞中缺乏真核细胞的转录后加工系统。
5.
原核生物基因表达的调控主要在转录水平
真核生物基因表达调控的特点：
1.
基因组DNA的存在形式可影响基因表达，其基因的表达调控比原核生物要复杂得多；
2. 3. 4. 5.
真核基因的转录和翻译不是偶联在一起的； 真核基因表达的调控是多层次的； 基因表达具有组织和细胞类型特异性；
不同的真核细胞在基因表达调控中对信号分子的反应不同。
24. 了解植物、动物和微生物基因工程的应用
植物基因工程的应用
(一)在植物遗传改良中的应用 (二)作为药物生产的反应器
动物基因工程的应用
1. 利用转基因技术改良动物遗传性状 2. 利用转基因动物生产生物大分子 3. 异种器官移植
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4. 利用转基因技术构建医学动物模型 5. 基因治疗
微生物基因工程的应用
(一)微生物基因工程在农业领域的应用 (二)微生物基因工程在工业领域的应用 (三)微生物基因工程在药物生产上的应用 (四)微生物基因工程在环境保护上的应用
25. 常见分子标记的种类、原理
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分子标记的类型
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Hibridization-based markers以分子杂交为基础的DNA标记技术（RFLP标记、DNA指纹技术、原位杂交）
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PCR-based markers以PCR反应为核心的分子标记技术（RAPD标记、SSR标记、SSLP标记、SCAR标记 、AFLP标记、STS标记）
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Sequencing based markers新型的分子标记（SNP标记、EST标记）
1.限制性片段长度多态性(restriction fragment length polymorphism, RFLP)
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原理：DNA序列上的微小变化，可能引起限制性内切酶切点的丢失或产生，导致酶切片段长度的变化。
2. 随机扩增多态性DNA标记(random amplified polymorphic DNA, RAPD)
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原理：用一个随机引物(8-10个碱基)非定点地扩增基因组DNA，然
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后用凝胶电泳分开扩增片段。
3. 扩增片段长度多态性(amplified fragment length polymorphism, AFLP)
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原理：先将基因组DNA用两种限制酶切成大小不等的片断，并与含有粘性末端的人工接头相连， 形成不同酶切位点的限制性酶切片段，然后用与接头和位点相匹配的引物进行预扩增，预扩增产物作为进一步PCR扩增的模板，再选用特异引物进行选择性扩增，扩增后的产物经聚丙烯酰胺凝胶电泳将特异的限制性片段分离。
4. 简单重复序列(simple sequence repeat, SSR)
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原理：根据两端序列的保守性，设计引物；进行PCR，电泳分离，染色显带以检测微卫星序列多态性。
一、名词解释（10个，20分） 二、填空题（20分，每空1分） 三、单项选择题（10题，10分） 四、判断题（10题，10分） 五、简答题（30分，每小题6分） 六、论述题（1题，10分） 第二章 填空题
1. 枯草芽孢杆菌蛋白酶；(1)5’→ 3’合成酶的活性；(2)3’→ 5’外切核酸酶
2. 碱性磷酸酶；5’端的磷酸基团
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3. DNA聚合酶I：5’→ 3’外切核酸酶；5’→3’ 合成酶 4. S1核酸酶切割；DNA聚合酶补平 5. 核酸水解酶H；RNA
6. 5’ → 3’合成酶；3’ → 5’外切核酸酶 选择题
1．b；2．b；3．b，c，d，e；4．b；5．d；6．b；7．a；8．a；9．d；10．b；11．d；12．abc；13．a，b；14．a；15．c；16．d；17．c；18.B；19. D；20. D；21. D 第三章
1. 质粒载体、噬菌体载体、质粒－噬菌体混合载体（或克隆载体、表达载体、整合载体）
2. 复制区、选择标记、克隆位点 3. 缺少选择标记，克隆位点
4. (1)分子量大 (2)酶的多切点 (3)无选择标记 5. 75%～105%
6．T-DNA区；Vir区；Con区；Ori区 7．b；8．b；9．a，c，d，e；10. d
20. 答:这种方法是根据组织化学的原理来筛选重组体。主要是载体上带有一个来自大肠杆菌的lac操纵子的DNA区段，这一区段编码β-半乳糖苷酶氨基端的一个蛋白片段。IPTG(异丙基-β-D-硫代半乳糖苷)可以诱导该片段的合成，而该片段能与宿主细胞所编码的β-半乳糖苷酶羧基端的一个蛋白片段互补(α-互补)。故暴露于诱导物IPTG的细菌含有编码lacZ
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的质粒可同时合成该酶的两种片段，该菌在其生色底物X-gal(5-溴-4-氯-3-吲哚-β-半乳糖苷)的培养基上生长，将形成蓝色茵落。将一连串克隆位点克隆入β-半乳糖苷酶氨基端的基因中，外源DNA插入质粒的多克隆位点后可使β-半乳糖苷酶的氨基端片段灭活，从而破坏了α-互补作用。因此，带有重组质粒的细菌将产生白色菌落。利用这种筛选方法可方便地将含目的基因的重组子从空载体中筛选出来。
β-半乳糖苷酶的N末端是非必需的，可以进行修饰，并不影响酶的活性或肽的互补性。如果插入的外源DNA 引起肽的可读框的改变，或者插入片段在正确的可读框中含有终止密码的话，就会形成白色噬菌斑。如果插入DNA 的碱基数正好是3 的倍数，或者插入的DNA 中不含有终止密码的话，仍然会形成蓝色噬菌斑。这种插入物的长度可达几百个碱基对。 第四章
1. 基因组DNA、线粒体DNA、叶绿体DNA、质粒DNA 2. B；3．D；4．D；5．C；6．C； 7. 外源基因是否转录 8. Northern杂交 9. Southern杂交
10. :(1)印迹的对象不同：Northern是RNA，Southern是DNA；(2)电泳条件不同，前者是变性条件，后者是非变性条件 11. 它可以和任何碱基配对
12. 螯合Mg2+离子，抑制核酸酶的活性
13. 中和 DNA 分子的负电荷，增加DNA 分子间的凝聚力
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基因工程期末复习材料-22页精选文档
