Syf2在非小细胞肺癌中的表达及其临床意义*
季俐俐1**，倪婷婷2，张冬梅2，3，刘益飞4，沈雁波5，王燏婵2*** 【摘 要】[摘 要] 目的：分析syf2在非小细胞肺癌中的表达情况及其与临床病理参数之间的关系。方法：Western Blot分析6对非小细胞肺癌组织和癌旁组织中syf2的蛋白表达差异，免疫组化分析89例非小细胞肺癌组织中syf2的表达情况。结果：Syf2在非小细胞肺癌组织中表达较癌旁组织高；syf2在非小细胞肺癌组织中的表达情况与肿瘤的分化程度及临床分级显著相关(P＜0.05)，与年龄、性别、肿瘤大小、组织学类型及肿瘤的淋巴结转移无相关性。结论：Syf2的表达与非小细胞肺癌的进展相关，提示syf2可能是非小细胞肺癌不良预后的一个指标。
【期刊名称】南通大学学报（医学版） 【年(卷),期】2013(000)006 【总页数】3
【关键词】[关键词] 非小细胞肺癌；syf2；免疫组织化学；预后
【文献来源】https://www.zhangqiaokeyan.com/academic-journal-cn_journal-nantong-university-medical-sciences_thesis/0201245470306.html
肺癌是全世界最常见的恶性肿瘤之一[1]。肺癌主要分为小细胞肺癌和非小细胞肺癌，其中非小细胞肺癌超过了80%[2]。尽管目前诊断治疗技术不断进步，但是肺癌的5年存活率依然比较低。Syf2，又称为p29，是一个与染色体相关的蛋白质[3]。最初是作为 Grap2 and cyclin D interacting protein(GCIP)相互作用蛋白被发现的[4]。目前关于syf2的研究[5]表明，syf2主要涉及细胞周期，前体mRNA的选择性切割以及DNA损伤修复，但是在肿瘤中的研究少见报道。
本文主要研究syf2在非小细胞肺癌中的表达情况，分析syf2与非小细胞肺癌的相关临床参数的关系，探讨syf2与非小细胞肺癌发生发展的关系。
1 资料与方法
1.1 一般资料 收集南通大学附属医院2006-2009年89例确诊为非小细胞肺癌的住院手术患者的肺癌组织蜡块标本，其中男50例，女39例。另取新鲜手术的6例配对的癌及癌旁组织(距离癌灶边缘5 cm)，标本置于-80℃保存。对肿瘤标本的使用研究获得南通大学医学院伦理委员会的批准，并且获得患者的知情同意。 1.2 实验方法
1.2.1 Western Blot 每0.1 g组织加入1 000 μL蛋白裂解液，匀浆器粉碎后置于冰上静置30 min，13 000 r/min离心15 min，取上清。加入上样缓冲液变性，煮沸15 min，每孔上样30 μg。电泳，湿转后用5%脱脂牛奶室温封闭2 h。孵育一抗syf2抗体(Santa Cruze 公司，SC-135409，兔源性，1：500)及一抗β-actin抗体(Santa Cruze公司，SC-47778，兔源性，1：1 000)于 4 ℃过夜。TBST 洗膜 5 min×3次，辣根过氧化物酶标记的二抗稀释液(山羊抗兔，1：5 000)室温孵育2 h。TBST洗膜10 min×3次。ECL发光。
1.2.2 免疫组织化学染色 免疫组化采用链霉菌抗生物素蛋白-过氧化物酶连结(SP)法，SP(过氧化物酶
标记的链霉卵白素)系列试剂盒(北京中杉金桥生物技术公司)。制备石蜡切片后，60℃烤片8 h，二甲苯脱蜡15 min×2次，梯度乙醇水化，高压加热法修复抗原。3%过氧化氢孵育10 min去除内源性过氧化物酶，正常动物血清封闭非特异性结合。抗syf2的抗体(1：500)，4 ℃孵育过夜。PBS 漂洗后，二抗(山羊
抗兔IgG)孵育10 min。链霉素抗生物素蛋白过氧化酶室温孵育10 min，PBS冲洗，DAB显色，苏木素复染，无水乙醇脱水，常规封片。以PBS代替一抗作为阴性对照。
1.2.3 免疫组化结果分析 Syf2主要位于细胞核，DAB染色呈棕黄色为阳性。根据染色细胞阳性百分比和染色程度综合评分。其中染色细胞阳性百分比评价标准为：无阳性细胞以及阳性细胞比例＜25%为0分，＞25%～50%为 1分，＞50%～75%为 2分，＞75%～100%为3分。染色强度评分标准为：无着色为0，浅黄色为1，棕黄色为2，棕褐色为3。将两者相乘，结果＞4者为高表达，0～3者为低表达。
1.2.4 统计学方法 采用SPSS 13.0统计软件进行数据分析，单因素两样本间率比较用χ2检验，P＜0.05为差异有统计学意义。
2 结果
2.1 Western Blot法检测syf2表达 在10对非小细胞肺癌组织以及癌旁非癌组织中检测syf2的蛋白表达情况，结果显示syf2在肿瘤组织中的表达量明显高于癌旁非肿瘤组织(图1)，其分子质量为29 ku，β-actin作为内参照。 2.2 免疫组化法检测syf2在非小细胞肺癌癌组织中的表达 免疫组化结果显示：syf2的表达主要位于细胞核(图2，见封二)，统计分析结果表明syf2的表达主要与非小细胞肺癌的分化程度及临床分级相关(P＜0.05)，与患者的性别、年龄、肿块大小和肿瘤淋巴结转移等无明显相关性(P＞0.05)，见表1。
3 讨论
肺癌是目前肿瘤相关死亡的首要原因[5]。目前肺癌的主要治疗方法包括：放疗，化疗以及手术治疗。尽管不断有新的治疗方法出现，但是肺癌的预后仍然较差，
Syf2在非小细胞肺癌中的表达及其临床意义
