恒温扩增检测结核分枝杆菌特异性IS6110片段在肺结核检
测中的应用
李玉雪1，王 薇1，柳晓金2，范 蓉1，安翠平1
【摘 要】摘要：目的 比较恒温扩增技术检测、抗酸杆菌涂片、结核分枝杆菌培养在肺结核患者检测中的应用。方法 收集2016年1月1日至12月31日我院呼吸科肺结核患者清晨痰液，将标本分为3份，分别进行痰涂片抗酸染色，结核菌培养及恒温扩增检测结核分枝杆菌特异性IS6110片段，统计分析3种方法的检测结果。结果 56例痰标本，恒温扩增检测结核分枝杆菌特异性IS6110片段阳性33例，阳性率为58.93%，抗酸染色阳性15例，阳性率为26.79%，恒温扩增检测结核分枝杆菌特异性IS6110片段阳性率高于抗酸染色方法；结核分枝杆菌培养阳性为35例，阳性率62.50%；恒温扩增检测结核分枝杆菌特异性IS6110片段和结核分枝杆菌培养两种方法检测Kappa系数为0.776，检测一致性较好。结论 恒温扩增检测结核分枝杆菌特异性IS6110片段是一种简便、高灵敏度的检出结核分枝杆菌的方法。 【期刊名称】标记免疫分析与临床 【年(卷),期】2017(024)011 【总页数】3
【关键词】肺结核； 结核分枝杆菌； 核酸扩增技术 ·方法研究·
肺结核是由结核分枝杆菌（TB）引起的慢性传染病。2010年，全球有880万罹患结核病，有140万人死于结核病（WHO，2010）。据世界卫生组织2015年统计报告显示，2014年全球共960万新发结核病例，其中150万死于肺结
核，我国新发肺结核患者93万，居世界第3位［1］。结核菌感染患者，病程长，药物副作用大，痰涂片检测虽简便易操作，但灵敏度较差。获取快速准确的病原学诊断结果对结核菌感染患者的有效治疗和控制其传播具有十分重要的意义。近年来随着多种技术的不断发展，以免疫学和PCR技术为代表的诊断技术成为结核病快速诊断的方向［2］。2000年 Notomi等［3］首先提出环介导恒温扩增技术（LAMP），该技术不需要常规核酸扩增所需的热循环及昂贵的仪器设备，在等温条件下可快速、高效、高特异性地扩增靶序列［4-6］。在此本研究探讨恒温扩增检测结核分枝杆菌特异性IS6110片段在肺结核检测中的应用。
材料和方法
1 研究对象
2016年1月1日至12月31日我院呼吸科就诊疑似肺结核患者，共计56例，年龄15～90岁，其中男性33例，女性23例，按照中华医学会结核病学分会制定的肺结核诊断和治疗指南［7］均诊断为肺结核。 2 仪器
梅里埃BacT/Alert3D全自动细菌培养仪、恒温水浴箱、漩涡振荡器、高速离心机、微量移液器。 3 方法
3.1 标本留取 病人清晨咳肺部痰于无菌防渗漏的50mL锥形管，最小标本量为3mL，最佳5～10mL。切勿唾液送检。室温下尽快运送。如果运输时间超过1h，将标本冷藏。送检频率为每天1次，连续3d。尽量用药前采集标本。 3.2 痰涂片检测 涂片自然干燥，火焰固定，加石炭酸复红溶液覆盖全片，染色
5min，水洗，加盐酸酒精覆盖全片，脱色1～2min，水洗，加亚甲蓝染液复染30s，水洗干燥后镜检。结果判定按照中国防痨协会基础专业委员会制定的实验室检查规程进行。
3.3 痰液结核分枝杆菌培养 取我院临床患者痰标本，采用半胱氨酸-氢氧化钠法进行前处理（半胱氨酸现用现配）。视痰液性状，加1～2倍体积的处理液于无菌痰杯中，用振荡器涡旋振荡30～60s，使痰液充分液化，室温放置 15～20min，移入50mL离心管中并加入等体积的pH6.8磷酸缓冲液，吹吸混匀，3000r/min离心20min，小心将上清液倒入含消毒剂的防溅废液瓶中，加入0.2%的牛血清1mL，混匀后取0.5mL注入 BacT ALERT3D（预先用75%酒精消毒瓶口，自然干燥，加入0.5mL抗生素补充剂）瓶中。BacT ALERT3D培养管置仪器培养，除了阳性，阴性标本42d报告结果。
3.4 痰液结核分枝杆菌特异性IS6110片段检测 使用商品化结核分枝杆菌核酸检测试剂盒，恒温扩增-试纸条法进行目的片段的检测。 4 统计学处理
使用SPSS16.0软件包进行统计分析。不同方法检出率差异分析采用χ2检验，对恒温扩增特异性IS6110片段检测和结核分枝杆菌培养两种检测结果运用Kappa检验进行一致性分析，Kappa系数≥0.8为高度一致，认为两种检测方法等效；0.4≤Kappa系数＜0.8认为一致，需进行符合率比较；Kappa系数＜0.4则认为两种检测结果不一致，两方法不等效。P＜0.05为差异有统计学意义。
结 果
1 三种检测方法的检出率比较分析
56例肺部结核患者痰液标本肺结核分枝杆菌3种检测方法检出率分别为：痰涂
恒温扩增检测结核分枝杆菌特异性IS6110片段在肺结核检测中的应用
