活化的部分凝血活酶时间(APTT)检测介绍
用途
液体试剂，提纯的大豆和兔脑磷脂，以及血浆激活物。是一种活化的部分凝血活酶试剂，对狼疮样抑制剂的敏感性升高，用于测定活化部分凝血活酶时间和其它需要使用活化部分凝血活酶试剂的凝固方法。
概要和原理
活化的部分凝血活酶时间(APTT)，是一种全球通用的筛查方法，主要用于内源性凝血途径异常的评价，也用来检测因子Ⅱ、Ⅴ、Ⅹ或者纤维蛋白原等严重的功能障碍。APTT还广泛用于普通肝素疗效的监测方法中，血液凝固时间延长与肝素的水平成正比。在口服抗凝剂的患者中，血液循环中因子Ⅱ、Ⅶ、Ⅸ和Ⅹ的水平受到抑制，导致APTT延长。非特异性抑制剂，如狼疮样抗凝剂，能使APTT延长，但是，此类影响是可变的，而且通常认为与所采用的APTT试剂的性能有关。总之，APTT是一种重要的临床筛查试验，广泛应用于诊断凝血障碍性疾病、出血和血栓性疾病的治疗监测。
方法原理
孵育血浆、适当量的磷脂和表面激活剂能够激活内源凝血系统因子。添加的钙离子能触发凝血过程，然后测定凝固时间。
标本采集及准备
将9份新鲜病人血液和1份0.11或0.13mol/L的枸橼酸钠（3.2或3.8％）混合。商品化真空采血管含有指定抗凝剂，按血凝研究注意事项使用。对于特殊的研究，采集技术必须很好。
采集后，立即于室温下按1500转/分，至少离心15分钟离心血液标本。保存于室温下密封试管中。 若立即进行检测，则血浆可以不分离。否则，需将血浆与血细胞分离。分离血浆时，需使用塑料移液器，将其移至塑料试管中。请勿冰冻。非肝素化血浆应在采血后4小时内检测。
含有普通肝素的血浆应在采血后1小时内离心，室温下保存，4小时内检测。
乏血小板血浆可在≤－20℃冷冻条件下保存2周。冰冻血浆应在37℃快速融解，轻柔混匀，立即检测。样本在37℃下不得超过5分钟。关于样本准备与保存的详细信息请参考CLSI文件H21－A5。
操作方法 手工： 在37℃预温氯化钙 在37℃预温试剂1分钟（使用前混合）。 按下列步骤移入血凝试管中： 测试标本 质控血浆 试剂（预温） 0.1ml 0.1ml 血浆 0.1ml - 质控血浆 - 0.1ml 充分混匀。37℃孵育3分钟 预温氯化钙 0.1ml 0.1ml 在加入CaCl2时同时启动秒表，充分混合。在20秒后，观察凝块形成。 注：孵育试剂超过5分钟可引起因子V和VIII的失活，所以不推荐。 每个实验室必须测定其自身测试系统的最佳加热－活化时间。
用APTT进行普通肝素监测
APTT用于此目的时，必须记住因子对试验的影响。一般考虑如下情况：
(A) 采集的时间很重要，因为体内普通肝素的半衰期约为1.5小时。当使用肝素时，会立即产生抗
凝效果，但此效果随时间很快降低。尤其是间歇静脉给药时更明显。 (B) 用于标本采集的抗凝剂可改变试验结果。
（C）血小板第4因子，血小板α-颗粒中的肝素中和因子：在血小板损伤或聚集时能释放出来。为了防
止在体外发生这种情况，标本采集时必须尽量减少损伤。已知低温可诱导血小板聚集和释放PF-4，因此，肝素研究时推荐在室温下离心标本。
(D) 用APTT监测普通肝素受时间的影响，测试标本的延迟会使APTT出现缩短。所以，应尽快完成标本
的检测。
(E) 含肝素血浆的接触活化时间延长会使APTT延长。肝素化血浆中，不同活化时间可导致APTT差别极
大。必须强调，Dade Atin FSL试剂-血浆混合物的最佳预温-激活时间应严格标准化。
(F) 不同测试系统（如手工法、光学法等）显示的肝素敏感性不同，故应避免更换不同的测试系统。 (G) 在治疗前，应确定每位患者的APTT基线数据，以便很容易的测定每个患者相对于实验室建立的正
常范围的APTT数值。
(H) 研究显示，不同厂商的普通肝素因其原料成分而不同。体内也因应用肝素的类型、个体代谢和其他
辅助药物治疗有不同反应性。
I）由于APTT会随技术，方法，仪器，试剂批号及使用的肝素，每个实验室必须建立自身的治疗范围，
或者在以上因素改变时更改。这可以通过同时检测接受肝素治疗的病人样本的APTT及肝素浓度。剂量反应曲线可以从回归分析的数据中计算，与肝素浓度0.3～0.7U/mL（通过因子Ⅹa抑制物的检测）相应的APTT范围可以获得。
室内质量控制
在测试前，应做两个水平的质控品（1份是正常范围，1份是病理范围），至少应每8小时做一次质控。质控品必须当标本一样制备和处理。每个实验室应建立自身质控可信区间。范围通常是质控均值的±2.0至2.5倍标准差（SD）。若质控值超出可信范围，应检查质控品、试剂和仪器。在报告病人结果前，应将所有的步骤都文件化，记录发现问题和纠正问题的过程。使用新质控品或试剂前，应重新制定质控范围。
结果
活化部分凝血活酶时间的结果以秒报告。这些结果与每个实验室自身的正常范围相关。建议病人结果报告时应同时提供正常范围。试剂测试系统的质控数据不能替代正常值。此外，仅报告APTT结果高于正常值会做出错误解释。APTT结果缩短也见于病人凝血系统异常。APTT与体外肝素水平有剂量反应关系。
方法的局限性
APTT试验涉及接触因子到纤维蛋白形成的全部凝血过程，因此，比其他特特异性试验影响因素更多。所以，APTT试验的应用和控制有固有的局限性。强调应严格控制血浆样本环境。研究显示，没有冷藏的贮存样品很快发生变质。不能使用很少量的血浆（已先作过实验），因为血浆中pH的生理条件发生变化会导致异常结果。这种变化会引起血浆中血凝系统相关成分的破坏。必须记住，APTT受多种常用药物的影响。有报道称，男性雌激素治疗和女性口服避孕药可使APTT时间缩短。苯妥英、肝素、华法令、纳洛酮和放射制剂可使APTT延长。治疗剂量的水蛭素或其他凝血酶直接抑制剂会延长凝固时间。
另外，不同的抗凝剂（如枸橼酸盐或草酸盐）和标本情况（如溶血、脂血、注射用药等）可影响结果。
特别是后者影响光学法APTT测定。凝血因子缺乏会引起凝固时间延长，可以通过增加一个或多个因子水平得以补偿而纠正。同样，活化中间产物出现会降低凝固时间，使正常的APTT假性延长。多种因子的轻度缺乏会引起APTT升高。Dade Actin FSL试剂由于样本含狼疮样抗凝物而得到不同的结果。意外的APTT结果异常应作进一步研究，判断异常结果的原因。
肝素作为抗凝剂是其与血浆辅因子结合的能力有关，从而影响凝血代谢中各个方面，降低纤维蛋白形成的速度。详见“用APTT进行普通肝素监测”部分。低水平的抗凝血酶Ⅲ能降低患者对肝素治疗的
反应性。抗凝血酶Ⅲ与血凝物质丝氨酸蛋白酶、凝血酶和因子Ⅹa、Ⅸa、Ⅺa、Ⅻa缓慢地形成灭活的复合物。肝素极大地加速了这种灭活过程，而这种多糖复合物的产生就是其发挥治疗作用的机理。本试验不检测血小板数量或质量的异常、独立的因子VII和因子XIII的缺乏或血管的功能障碍。对于含有非特异性狼疮样抗凝血物质的患者标本来说，会使得APTT值延长。
检测结果须结合患者病史、临床表现及其他症状作出合理解释。
预期结果
各实验室间的参考范围会因检测人群的不同以及所用的技术、方法、仪器和试剂批号的不同而不同。因此，每个实验室必须建立自身的参考范围或者当上述的一种或多种因素变化时进行修改。
以下数据是使用某批号Dade Actin FSL 试剂对健康人群的研究而获得的： 中位数 90%参考区间 5% 95% Sysmex CA-1500上111名个体 27.3秒 25.0秒 31.3秒 BCS上111名个体 28.6秒 25.3秒 33.8秒 必须建立其他群体的参考范围，譬如儿童组。
注：CLSI文件C28-A2（引证H47-A）声明，采用正态分布的方法（均值±2SD）。但是，必须核查此假设（Gaussian正态分布）。
活化的部分凝血活酶时间(APTT)检测介绍
