2、郑筱萸.《化学药品和治疗用生物制品研究指导原则（试行）》. 中国医药科技出版社，2002年5月. 第57~62页
3、ICH. S3B: Pharmacokinetics: guidance for repeated dose tissue distribution studies. 1994
4、EMEA. 3BS11A: Pharmacokinetics and metabolic studies in the safety evaluation of new medicinal products in animals. http://pharmacos.edura.org. 1994.4
5、秦伯益主编.《新药评价概论》(第二版). 人民卫生出版社. 1998年12月
6、FDA. FDA’s policy statement for the development of new stereoisomeric drugs. http://www.fda.gov/cder/guidance/stereo.htm. 1992.5.1
7、国家药典委员会. 药物制剂人体生物利用度和生物等效性试验指导原则，《中华人民共和国药典2005年版附录增修订内容汇编（二部）》. 2003年7月
8、FDA. Guidance for industry: Bioanalytical method validation，U.S. Department of Health and Human Services. 2001.5
9、Shah VP, Midha KK, Findlay JWA, et al. Bioanalytical method validation?A revisit with a decade of progress. Pharmaceutical Research, 17: 1551-1557. 2000
10、USP 25. 2002
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八、附录
生物样品分析方法的基本要求
1、基本概念
生物样品分析方法的基本参数包括：（1）准确度，（2）精密度，（3）特异性，（4）灵敏度，（5）重现性，（6）稳定性。现将相关的概念介绍如下：
准确度：在确定的分析条件下，测得值与真实值的接近程度。 精密度：在确定的分析条件下，相同介质中相同浓度样品的一系列测量值的分散程度。
特异性：分析方法测量和区分共存组分中分析物的能力。这些共存组分可能包括代谢物、杂质、分解产物、介质组分等。
灵敏度：生物样品分析方法的灵敏度通过标准曲线来表征，主要包括定量下限和浓度-响应函数。
重现性：不同试验室间测定结果的分散程度，以及相同条件下分析方法在间隔一段短时间后测定结果的分散程度。
稳定性：一种分析物在确定条件下，一定时间内在给定介质中的化学稳定性。
标准曲线：试验响应值与分析物浓度间的关系。应采用适当的加权和统计检验，用简单的数学模型来最适当地描述。标准曲线应是连续的和可重现的，应以回归计算结果的百分偏差最小为基础。
提取回收率：分析过程的提取效率，以样品提取和处理过程前后分析物含量百分比表示。
定量范围：包括定量上限（ULOQ）和定量下限（LLOQ）的浓度范围，
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在此范围内采用浓度-响应关系能进行可靠的、可重复的定量，其准确度和精密度可以接受。
生物介质：一种生物来源物质，能够以可重复的方式采集和处理。例如全血、血浆、血清、尿、粪、各种组织等。
介质效应：由于样品中存在干扰物质，对响应造成的直接或间接的影响。 分析批：包括待测样品、适当数目的标准样品和质控样品的完整系列。一天内可以完成几个分析批，一个分析批也可以持续几天完成。
标准样品：在生物介质中加入已知量分析物配制的样品，用于建立标准曲线，计算质控样品和未知样品中分析物浓度。
质控样品：即QC样品，系指在生物介质中加入已知量分析物配制的样品，用于监测生物分析方法的重复性和评价每一分析批中未知样品分析结果的完整性和正确性。
2、生物样品分析方法的建立和确证
由于生物样品取样量少、药物浓度低、内源性物质（如无机盐、脂质、蛋白质、代谢物）及个体差异等多种因素影响生物样品测定，所以必须根据待测物的结构、生物介质和预期的浓度范围，建立适宜的生物样品分析方法，并对方法进行确证。
分析方法确证分为全面确证和部分确证两种情况。对于首次建立的生物样品分析方法、新的药物或新增代谢物定量分析，应进行全面方法确证。在其他情况下可以考虑进行部分方法确证，如生物样品分析方法在试验室间的转移、定量浓度范围改变、生物介质改变、稀少生物介质、证实复方给药后分析方法的特异性等。
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应考察方法的每一步骤，确定从样品采集到分析测试的全过程中，环境、介质、材料或操作上的可能改变对测定结果的影响。 （1）特异性
必须证明所测定的物质是预期的分析物，内源性物质和其他代谢物不得干扰样品的测定。对于色谱法至少要考察6个不同个体空白生物样品色谱图、空白生物样品外加对照物质色谱图（注明浓度）及用药后的生物样品色谱图。对于以软电离质谱为基础的检测方法（LC-MS、LC-MS/MS等），应注意考察分析过程中的介质效应，如离子抑制等。 （2）标准曲线与定量范围
根据所测定物质的浓度与响应的相关性，用回归分析方法（如用加权最小二乘法）获得标准曲线。标准曲线高低浓度范围为定量范围，在定量范围内浓度测定结果应达到试验要求的精密度和准确度。
用至少5个浓度建立标准曲线，应使用与待测样品相同的生物介质，定量范围要能覆盖全部待测浓度，不允许将定量范围外推求算未知样品的浓度。建立标准曲线时应随行空白生物样品，但计算时不包括该点。 （3） 精密度与准确度
要求选择3个浓度的质控样品同时进行方法的精密度和准确度考察。低浓度选择在定量下限附近，其浓度在定量下限的3倍以内；高浓度接近于标准曲线的上限；中间选一个浓度。每一浓度每批至少测定5个样品，为获得批间精密度，应至少连续3个分析批合格。
精密度用质控样品的批内和批间相对标准差（RSD）表示，相对标准差一般应小于15%，在定量下限附近相对标准差应小于20%。
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准确度一般应在85%～115%范围内，在定量下限附近应在80%～120%范围内。
（4） 定量下限
定量下限是标准曲线上的最低浓度点，要求至少能满足测定3～5个半衰期时样品中的药物浓度，或Cmax的1/10～1/20时的药物浓度，其准确度应在真实浓度的80%～120%范围内，RSD应小于20%。应由至少5个标准样品测试结果证明。 （5） 样品稳定性
根据具体情况，对含药生物样品在室温、冰冻或冻融条件下以及不同存放时间进行稳定性考察，以确定生物样品的存放条件和时间。还应注意储备液的稳定性以及样品处理后的溶液中分析物的稳定性。 （6） 提取回收率
应考察高、中、低3个浓度的提取回收率，其结果应精密和可重现。 （7） 微生物学和免疫学分析
上述分析方法确证的很多参数和原则也适用于微生物学或免疫学分析，但在方法确证中应考虑到它们的一些特殊之处。微生物学或免疫学分析的标准曲线本质上是非线性的，所以尽可能采用比化学分析更多的浓度点来建立标准曲线。结果的准确度是关键的因素，如果重复测定能够改善准确度，则应在方法确证和未知样品测定中采用同样的步骤。
3、生物样品分析方法的应用
应在生物样品分析方法确证完成之后开始测试未知样品。推荐由独立的人员配制不同浓度的标准样品对分析方法进行考核。
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化学药物非临床药代动力学研究技术指导原则
