全血总RNA提取试剂盒
(离心柱型)
货号：KTSM2908
■ 产品简介：
本产品适用于从血液中提取高品质总RNA。本试剂盒配有独特的裂解体系，将RNA从组织中释放出来后在高离序盐状态下选择性吸附于离心柱内硅基质膜，再通过去蛋白液和漂洗液将蛋白等杂质去除，最后由RNase-Free Water将RNA从硅基质膜上洗脱下来。
本产品提取RNA方便快捷，无需使用氯仿、苯酚等有毒有害化学物质，对操作人员及实验环境无毒害作用。
■ 主要成分：
产品组成 10 x红细胞裂解液 裂解液RG 去蛋白液RD 漂洗液RW RNase-Free-Water DNase Ⅰ 10 x DNaseⅠ buffer RNase-Free吸附柱R1（含2 ml收集管） RNase-Free过滤柱RF（含2 ml收集管） RNase-Free 离心管（1.5ml） KTSM2908（50次） 60 ml 30 ml 16 ml 12 ml 15 ml 1 ml 500 μl 50个 50个 50个 ■ 保存条件：DNase I，10 × DNase I Buffer置于-20℃保存；其他溶液于室温（15-25℃)保存。 ■ 自备试剂：无水乙醇，β-巯基乙醇。 ■ 注意事项：
1． 第一次使用前请先在去蛋白液RD和漂洗液RW瓶中加入指定量无水乙醇，并做好标记。
2． 裂解液RG在使用前请加入β-巯基乙醇至终浓度为1%，如1 ml裂解液RG加10 μl β-巯基乙醇。加入β-巯基乙醇的裂解液RG在4℃可保存1个月，如出现沉淀，请加热溶解后使用。
3． 裂裂解液RG和去蛋白液RD中含有刺激性有害化合物，操作时要戴乳胶手套，避免沾染皮肤、眼睛和衣服。若沾染皮肤、眼睛时，要用大量清水或者生理盐水冲洗。
4． 人类的血液或体液可能有潜在的感染性，所以如果对人类的全血进行处理，请注意做好防护措施。 5． 在白细胞裂解后，该说明书中的所有步骤需在室温（15-25℃）进行，操作速度越快越好。 6． 本试剂盒不适用于冻存的全血。
■ 预防RNase污染：
1． 全程佩戴一次性手套，经常更换新手套。皮肤经常带有细菌和霉菌，可能污染RNA的抽提并成为RNA酶的来源。培养良好的微生物实验操作习惯预防微生物污染。
2． 使用无RNA酶的非一次性的玻璃器皿或塑料器皿。玻璃器皿可以在150℃的烘箱中烘烤4 h，塑料器皿可以在0.5 M NaOH中浸泡10 min，用水彻底漂洗干净后高压灭菌备用。
■ 操作步骤：
1． 向新鲜的抗凝全血样本中，加入5倍血液样本体积的1×红细胞裂解液（请于使用前用 RNase-Free Water 将10×红细胞裂解液
稀释10倍），轻轻涡旋或颠倒混匀。冰上孵育10-15 min，孵育过程中混匀两次。 注意：孵育过程中浑浊的悬液会变成透明，证明红细胞被裂解，必要时可延长孵育时间。 2． 4℃ 2,100 rpm（~400×g）离心10 min，小心吸弃上清。
3． 向以上沉淀中加入2倍血液样本体积的1×红细胞裂解液（请于使用前用 RNase-Free Water 将10×红细胞裂解液稀释10倍），
轻轻涡旋，充分重悬沉淀。
4． 4℃ 2,100 rpm（~400×g）离心10 min，小心并彻底吸弃上清。
注意：此步一定要完全去除上清，否则影响裂解导致RNA产量下降。
5． 向沉淀中加入裂解液RG（使用前检查是否已经加入β-巯基乙醇），具体加量按照下表进行，涡旋混匀。
注意：如果血液不是健康人的全血，需要根据血液中白细胞的数量来确定所需裂解液RG的加入量。完全混匀后细胞应完全裂解，块状沉淀消失。 裂解液RG（μl） 350 600 6． 将以上所得液体转移到已装入收集管的 RNase-Free 过滤柱RF中，12,000 rpm离心2 min，收集滤液，弃掉过滤柱。 7． 向滤液中加入1倍体积的70%乙醇（RNase-Free Water 配制），混匀。
注意：加入乙醇后可能会产生沉淀，不会影响后续实验。
8． 将上步所得溶液全部加入到 RNase-free 吸附柱R1中，若一次不能加完溶液，可分多次转入。12,000 rpm离心30 sec，倒掉收
集管中的废液，将吸附柱重新放回收集管中。
9． 向吸附柱R1中加入350 μl去蛋白液RD（使用前请先检查是否已加入乙醇），12,000 rpm离心1 min，弃废液，将吸附柱重新
放回收集管中。
10． DNase I 工作液的配制：往新的 RNase-Free 离心管中分别加入20 μl DNase I，8 μl 10×DNase I Buffer和52 μl RNase-Free
Water，轻柔混匀。
11． 向吸附柱R1中央加入80 μl的DNase I 工作液，室温放置15 min。
12． 向吸附柱R1中加入350 μl去蛋白液RD，12,000 rpm离心30 sec，弃废液，将吸附柱放回收集管中。
13． 向吸附柱R1中加入500 μl 漂洗液RW（使用前请先检查是否已加入乙醇），室温静置2 min，12,000 rpm离心30 sec，弃废
液，将吸附柱R1放回收集管中。 14． 重复操作步骤13。
15． 12,000 rpm离心2 min，倒掉废液。将吸附柱R1置于室温放置数分钟，以彻底晾干吸附材料中残余的漂洗液。
注意：此步骤目的是将吸附柱R1中残余的漂洗液去除，漂洗液的残留，可能会影响后续的 RT-PCR 等实验。
（1）将吸附柱R1转入一个新的 RNase-Free 离心管中，向吸附膜的中间部位悬空滴加30-50 μl RNaseFree Water，室温放置2 min，12,000 rpm离心2 min，得到RNA溶液。
注意：洗脱缓冲液体积不应少于30 μl，体积过小影响回收效率。如果要提高RNA 浓度，可将得到的溶液重新加入到吸附柱中，室温放置1 min，12,000 rpm离心2 min。RNA溶液请于-80℃保存。
（2）
健康人类全血（ml） 小于0.5 0.5-1.5 白细胞数量 多至2×106 2×106-1×107
全血总RNA提取试剂盒
