加热融化基础培养基并冷却至 50℃，同时分别加热亚硫酸铋贮备液和柠檬酸铁煌绿贮 备液至 50℃。在无菌操作下将后者加入到前者去，充分混合，无菌倾入已灭菌的培养皿中。 B2.5 三糖铁琼脂培养基（TSI 培养基） B2.5.1 成分
蛋白胨 20g 牛肉膏 5g 乳糖 10g 蔗糖 10g 葡萄糖 1g
氯化钠 5g 硫酸亚铁铵 0.2g 硫代硫酸钠 0.2g 琼脂 12g 酚红 0.025g 蒸馏水 1000mL
B2.5.2 制法
将除琼脂和酚红以外的各成分溶解于蒸馏水中，调 pH 到 7.4。加入琼脂，加热煮沸， 再加入 0.2%酚红水溶液 12.5mL，摇匀。分装试管，装量宜多些，以便得到较高的底层。121 ℃下灭菌 15min。放置高层斜面备用。 B2.6 沙门氏菌诊断血清 B3 检验程序
检验程序见图 B。
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污水样品处理：稀释 污水样品处理：过滤 增菌：将样品接种于二倍浓度SF 37℃、培养24h 平板分离：将增菌培养液分别接种于SS和BS 37℃、培养24～48h 平板分离：挑选可疑菌落接种于TSI 37℃、培养18～24h 鉴定：生化、血清学试验 检验结果报告
图 B污水、污泥中沙门氏菌检验程序
B4 操作步骤
B4.1 样品处理和增菌
B4.1.1 污水
取 200mL 污水，用灭菌滤膜进行抽滤。用 100mL 二倍浓度 SF 增菌液把滤膜上截留的杂 质洗脱到灭菌三角烧瓶内，充公摇匀，置于 37℃恒温培养箱，增菌培养 12～24h。
注：若样品为经过氯消毒的污水，应在采样后立即用 5％硫代硫酸钠溶液充分中和余氯。
B4.1.2 污泥
用灭菌匙称取污泥 20g，放入灭菌容器内，加入 200mL 灭菌水，充分混匀，制成 1：10 混悬液。吸取上述 1：10 混悬液 100mL，加入到装有 100mL 二倍浓度 SF 增菌液的已灭菌的
三角烧瓶内，摇匀，置于 37℃恒温培养箱，增菌培养 24h。
注：若样品为经过氯消毒的污泥，应在采样后立即用 5％硫代硫酸钠溶液充分中和余氯。
B4.2 平板分离
取上述增菌培养液，分别接种于 SS 培养基平板和 BS 培养基平板，置于 37℃培养箱中， 培养 24～48h。观察各平板上生长的菌落形态。
挑取在 SS 培养基平板上呈无色透明或中间有黑心，直径 1～2mm 的菌落；挑取在 BS 培 养基平板上呈黑色的菌落或灰绿色的可疑肠道病原菌菌落。每个平板最少挑取 5 个菌落，接 种于 TSI 培养基中，置于 37℃培养箱中，培养 18～24h。 B4.3 鉴定
B4.3.1 血清学试验
在 TSI 培养基中，如不发酵乳糖，发酵葡萄糖产酸产气或只产酸不产气，一般产生硫
化氢，有动力者，先与沙门氏 A-F 群 O 多价血清作玻璃片凝集，凡与多价 O 血清凝集者，再 与 O 因子血清凝集，以确定所属群别，然后用 H 因子血清，确定血清型。双向菌株应证实两 相的 H 抗原，有 Vi 抗原的菌型(伤寒和丙型副伤寒沙门氏菌)应用 Vi 因子血清检验。 B4.3.2 生化试验
应进行葡萄糖、甘露醇、麦芽糖、乳糖、蔗糖、靛基质、硫化氢、动力、尿素试验。沙 门氏菌属中除伤寒沙门氏菌和鸡沙门氏菌不产气外，通过发酵葡萄糖、产气、均发酵甘露醇 和麦芽糖(但猪沙门氏菌、雏沙门氏菌不发酵麦芽糖)，不分解乳糖、蔗糖，尿素酶和靛基质 为阴性，通常产生硫化氢。除鸡、雏沙门氏菌和伤寒沙门氏菌的 O 型菌株无动力外，通常均 有动力。
如遇多价 O 血清不凝集而一般生化反应符合上述情况时，可加做侧金盏花醇、水杨素和 氰化钾试验，沙门氏菌均为阴性。 B5 检验结果报告
根据检验结果，报告一定体积的样品中存在或不存在沙门氏菌。
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附录 C
(规范性附录)
医疗机构污水及污泥中志贺氏菌的检验方法
C1 仪器和设备
C1.1 高压蒸汽灭菌器 C1.2 干燥灭菌箱。 C1.3 培养箱。 C1.4 恒温水浴箱。 C1.5 电炉。 C1.6 天平。 C1.7 灭菌平皿。
C1.8 灭菌刻度吸管。
C1.9 酒精灯。
C2 培养基和培养液
C2.1 革兰氏阴性增菌液(GN 增菌液) C2.1.1 成分
胰蛋白胨(或多价胨) 20g 葡萄糖 1g 甘露醇 2g 枸橼酸钠 5g 去氧胆酸钠 0.5g 磷酸氢二钾 16g 磷酸二氢钾 2.5g 氯化钠 5g
蒸馏水 1000mL
C2.1.2 制法
将以上各成分加入蒸馏水中溶化，调整 pH 至 7.0，煮沸过滤，115℃下灭菌 20min。贮 存于冷暗处备用。
C2.2 二倍浓度革兰氏阴性增菌液(二倍浓度 GN 增菌液) C2.2.1 成分
除蒸馏水改为 500mL 外，其它成分同附录 C2.1.1。 C2.2.2 制法
制法同附录 C2.1.2。 C2.3 SS 培养基
同附录 B2.3。
C2.4 伊红美蓝琼脂培养基(EMB 培养基)
同附录 A2.3。
C2.5 三糖铁琼脂(TSI 培养基)
同附录 B2.5。
C2.6 志贺氏菌诊断血清 C3 检验程序
检验程序见图 C。
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污水样品处理：过滤 污水样品处理：稀释
增菌：将样品接种于双倍浓度GN 37℃、6～8h培养 平板分离：将增菌培养液分别接种于SS和EMB
37℃、培养24h 平板分离：挑选可疑菌落接种于TSI
37℃、培养18～24h 鉴定：生化、血清学试验 检验结果报告
图 C 污水、污泥中志贺氏菌检验程序
C4 操作步骤
C4.1 样品处理和增菌培养 C4.1.1 污水
取 200mL 污水，用灭菌滤膜进行抽滤。用 100mL 二倍浓度 GN 增菌液把滤膜上截留的杂 质洗脱到已灭菌的三角烧瓶内，摇匀，置于 37℃恒温培养箱，增菌培养 6～8h。
注：若样品为经过氯消毒的污水，应在采样后立即用 5％硫代硫酸钠溶液充分中和余氯。
C4.1.2 污泥
取污泥 30g，放入灭菌容器内，加入 300mL 灭菌水，充分混匀制成 1：10 混悬液。吸取
上述 1：10 混悬液 100mL，加入到装有 100mL 二倍浓度 GN 增菌液的已灭菌的三角烧瓶内， 搅匀，置于 37℃恒温培养箱中，增菌培养 6～8h。
注：若样品为经过氯消毒的污泥，应在采样后立即用 5％硫代硫酸钠溶液充分中和余氯。
C4.2 分离
取上述增菌培养液，分别接种 SS 培养基平板和 EMB 培养基平板，置于 37℃培养箱中培 养 24h。
挑取在 SS 培养基平板和 EMB 培养基平板上呈无色透明，直径 1～1.5mL 的可疑肠道病原 菌菌落。每个平板最少挑取 5 个菌落，接种于 TSI 培养基，置于 37℃培养箱中培养 18～24h。
挑取在 TSI 中，葡萄糖产酸不产气，无动力，不产生硫化氢，上层斜面乳糖不分解的菌 株，可做血清学和生化试验。 C4.3 鉴定
C4.3.1 血清学试验
志贺氏菌属分为四个群，先与多价血清作玻璃片凝集试验，如为阳性，再分别与 A、B、
C、D 群血清凝集，并进一步与分型血清做玻璃片凝集，最后确定其血清型。 C4.3.2 生化试验
应进行葡萄糖、甘露醇、麦芽糖、乳糖、蔗糖、靛基质、硫化氢、动力、尿素试验。志
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贺氏菌属能分解葡萄糖，但不产气(福氏志贺氏菌 6 型有时产生少量气体)，一般不能分解乳 糖和蔗糖，宋内氏志贺氏菌对乳糖和蔗糖迟缓发酵产酸。志贺氏菌属均不产生硫化氢，不分 解尿素，无动力。对甘露醇、麦芽糖的发酵及靛基质的产生，则因菌株不同而异。
如遇多价血清玻璃片凝集试验为阴性，而生化反应符合上述情况时，可加做肌醇、水
杨酸、V-P、橼酸盐、氰化钾等试验。志贺氏菌属均为阴性反应。 C5 检验结果报告
根据检验结果，报告一定体积的样品中存在或不存在志贺氏菌。
附录 D
(标准的附录)
医疗机构污泥中蛔虫卵的检验方法
D1 仪器和设备 D1.1 离心机。
D1.2 金属筛：60 目。 D1.3 显微镜。
D1.4 恒温培养箱。 D1.5 高压蒸汽灭菌器。 D1.6 冰箱。 D1.7 振荡器。 D2 培养基和试剂
D2.1 3%福尔马林溶液或 3%盐酸溶液
D2.2 饱和硝酸钠溶液（比重 1.38～1.40）或饱和氯化钠溶液 D2.3 30%次氯酸钠溶液 D3 检验程序
蛔虫卵检验程序见图 D。
蛔虫卵收集（分离）：加氢氧化钠溶液振荡 蛔虫卵收集（水洗）：加蒸馏水离心 倒去上清液 蛔虫卵收集（漂浮）：加饱和硝酸钠溶液离心 吸取上层浮膜 蛔虫卵收集（沉淀）：加蒸馏水离心 培养 镜检：生死虫卵数 检验结果报告 图 D污泥中蛔虫卵检验程序
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GB18466-2005《医疗机构水污染物排放标准》
