创伤弧菌溶细胞毒素单克隆抗体制备及其鉴定

创伤弧菌溶细胞毒素单克隆抗体制备及其鉴定

张家敏;楼永良;应斌宇;严杰

【期刊名称】《中国人兽共患病学报》 【年(卷),期】2006(022)011

【摘要】目的 制备创伤弧菌(Vibrio vulnificus)溶细胞素vvhA基因产物鼠源性单克隆抗体并鉴定其特异性和免疫性,为进一步研制创伤弧菌检测试剂盒奠定基础.方法 采用IPTG诱导目的重组蛋白rvvhA表达,Ni-NTA亲和层析法提纯rvvhA,SDS-PAGE检测表达和提纯效果.采用杂交瘤技术和rvvhA-ELISA制备并筛选分泌rvvhA单克隆抗体的细胞株,有限稀释法进行细胞克隆.采用免疫双扩散法鉴定单克隆抗体类型.采用ELISA、免疫双扩散法和Western Blot鉴定单克隆抗体的效价和特异性.结果 在0.5 mmol/L IPTG诱导下,rvvhA产量可占细菌总蛋白的18%.提纯的rvvhA经SDS-PAGE后仅显示单一的蛋白条带.共获得9株rvvhA抗体阳性的杂交瘤细胞株,其中A5E8和C3B6株可持续分泌高效价特异性单克隆抗体,其抗体类型分别为IgG1和IgG2a.A5E8和C3B6单克隆抗体有较高特异性,与多种其它细菌蛋白不发生免疫反应,对rvvhA及创伤弧菌GTC333株和WZ01株蛋白的ELISA检测阳性的效价可达1:4000～1:8000、免疫双扩散效价为1:4～1:8,Western Blot结果显示此等单克隆抗体均能有效识别rvvhA.结论 本研究成功地获得了2株稳定分泌rvvhA特异性单克隆抗体的鼠源性杂交瘤细胞株,rvvhA单克隆抗体可用于检测自然表达的创伤弧菌溶细胞素.

【总页数】4页(1055-1058)

【关键词】创伤弧菌;溶细胞素;vvhA基因;原核表达;单克隆抗体