经皮气管穿刺法建立家兔白色念珠菌肺炎动物模型
李军;庞龙滨;李哲;杨艳平
【摘 要】动物模型的建立是研究各种疾病诊断和治疗的先决条件，而目前国内尚无白色念珠菌(下称白念菌)肺炎动物模型的研究。2004年10月，我们通过经皮气管内穿刺法成功建立了白念菌肺炎动物模型。 【期刊名称】《山东医药》 【年(卷),期】2005(045)004 【总页数】2页(P23-24)
【关键词】白色念珠菌;家兔;动物模型 【作 者】李军;庞龙滨;李哲;杨艳平
【作者单位】济南市中心医院,山东,济南,250013;济南市中心医院,山东,济
南,250013;济南市中心医院,山东,济南,250013;济南市中心医院,山东,济南,250013 【正文语种】中 文 【中图分类】医药卫生
2005年第 45 卷第 4 期山东医药经 皮气管 穿 刺法 建立 家兔 白色念 珠 菌肺 炎 动 物模 型李 军 庞龙 滨 李哲 杨艳平【 关键词】 白色念珠菌【中图分类号】 R563.1家兔 动物模型 【 文献标识码】 A动物模型 的建立是研究各种疾病诊断和治疗 的 先 决 条件 ，而 目前 国 内 尚无 白色念珠 菌 （ 下 称 白念 菌 ） 肺炎 动物模型 的研究 。 2004 年 10 月 ，我们通过 经 皮气管内穿刺法成功建立 了 白念菌肺炎动物模型 。1材料与方法1.1 实验对象 中国本兔18 只 （ 购 于 山东大学
医学院实验动物 中心 ） ，雄性 ，体重2 ～2.5kg。 随机分为实 验组与对 照组各9 只 ，按普通动物 、 开 放 系统 的要求 饲养动物 。 1.2实验动物的预处理 1.2.1免疫抑制动物模型 的建立 两组于实验第1～ 5 天 ，每 日耳缘静脉 注 射 阿糖胞 苷440mg/m2 ，6 天后隔 日1次维持低免疫状态‘ 1]。于实验第1 、 6天分别做血常规 比较 。1.2.2 应用 抗生 素预 防细菌感染 第4 日起 ，两 组均给予万古霉素15mg/kg 、 头孢他定 150mg/kg 静脉 注射 ，每 日1 次 ；庆大霉素5mg/kg 静脉注射 ， 隔 日1 次‘ 1．z]。1.3 接种菌液制备 采用分 区 划线法将复活后 的白念菌（ 购于山东省疾病预防控制 中心 ） 接种于科玛 嘉显色培养基上 。放A37 ℃ 温箱 ，孵育24 小时平皿上 可 见密度不 等、 表 面光 滑、 圆形翠绿色菌落。 将分离 培养的 白念菌接种 于50ml 沙保罗 液体培养基 中，置 于37 ℃ 振荡培养箱中振荡培养18 小时。 以3000r/min 离心 5 分钟 ，弃上 清 ，反 复加入无 菌生理盐水 10ml 冲 洗2 次。将离心后 的沉淀物加入生理盐水5ml 混匀 ，制 成菌液 ，显微镜下 ，用计数器计数菌液 的浓度 。 调 整 原菌液浓度为5 × 108 个/ml ，置于4 ℃冰箱保存备用 。1.4实验动物 白念菌接种 实验组于第6 日采用经 皮气 管穿刺法接种 ：将麻 醉后 的动物固定于 手术操作者单位：济南市中心医院，山东济南250013·基 础 研 究作 台上 ，以左手拇指食指固定气管 ， 向气管 内注入 白 念菌菌液0.2ml（ 含 白念菌1 × 108 个） ，立 即将家兔取 头高脚低位，使菌液易进入下气道 。对照组 同时用相 应剂量的生理盐水气管内注入 。 1.5 标本 留取 分别于接种后1 、 3 、 5 日取两 组家兔各3 只 ，在其胸骨上端沿 中线剪开胸骨 ，剪破胸腔 ，处 死家兔 。 于喉下 方第2 软骨环 处剪断气管 ，分离气管 旁结缔组织 ，沿气管方 向钝性分离心肺 与胸壁组织 ， 将心肺完全游离 出胸廓后 ，钝性分离心脏与肺组织 。 肺组织称重 ，先 肉眼观其病理变化 ，再将其置 于 4% 福尔马林液 中固定24 小时以上 ，病理切片行 PAS 染 色 ，观察镜下病理变化 。 2 结果2.1 白细胞计数 免疫抑制前后 两 组动物 白细胞计数
比较采用配对 f 检验 ，二者有 显 著性差异 (P< 0.05)。2.2 肺组织病理变化 ①对照组肺组织呈粉红色 ，柔 软 ，无硬 节 。 气 管、 支气管及 各级 细支气 管 内无分 泌物 ，气道周少量正常淋巴组织 ，肺泡清亮 ，无充血、 淤血及细胞浸润 。 ②实验组 ：第1 天基本 与对 照 组 一 致 。 镜下气道 内可 见 真菌孢 子 。 第3 天肺组织 表面 可 见大小不 一 的灰 白色病灶 ，柔 软 ，无硬节 。 支气管 内 见少许分泌物 ，气道周有淋巴 、 单核细胞浸润 ，肺组 织 充血 、 瘀 血 ，部 分肺 泡 内有蛋 白样 物及 炎细胞 渗 出 ，部分肺泡代偿性扩张 ，肺泡间质有少许陈旧性 出 血 （ 含铁血黄素） 。 肺组织 内有 片状坏死灶 ，界限较清 晰，肺组织呈 干 酪样坏死 ，肺泡结构 尚存 ，腔 内为 坏 死物及少量孢子 。 第5 天肺组织表面可见大小不一 的 圆形 、 灰黑色病灶，触之呈结节状 ，质硬 。部分 支气管 内为脱落的上皮细胞 ，粘膜下见淋巴细胞 聚集 ，部分 小 支气管 内含孢子及 菌丝 的坏死物 ， 部分气 管 粘膜23李军庞龙 滨哲杨艳平关键词】白色念珠菌家兔动物模型文献标识码】 A动物模型 的建立是研究各种疾病诊断和治疗 的先 决 条件 ，而 目前 国 内 尚无 白色念珠 菌 （ 下 称 白念菌 ） 肺炎 动物模型 的研究 。 2004 年 10 月 ，我们通过 经皮气管内穿刺法成功建立 了 白念菌肺炎动物模型 。 1材料与方法 1.1实验对象中国本兔18 只 （ 购 于 山东大学医学院实验动物 中心 ） ，雄性 ，体重2 ～2.5kg。 随机分为实验组与对 照组各9 只 ，按普通动物 、 开 放 系统 的要求饲养动物 。血常规 比较 。 1.2.2应用 抗生 素预 防细菌感染 第4 日起 ，两 组均给予万古霉素15mg/kg 、 头孢他定 150mg/kg 静脉注射 ，每 日1 次 ；庆大霉素5mg/kg 静脉注射 ， 隔 日1次‘ 1．z] 1.3接种菌液制备 采用分 区 划线法将复活后 的白念菌（ 购于山东省疾病预防控制 中心 ） 接种于科玛嘉显色培养基上 。放A37 ℃ 温箱 ，孵育24 小时平皿上可 见密度不 等、 表 面光 滑、 圆形翠绿色菌落。 将分离培养的 白念菌接种 于50ml 沙保罗 液体培养基 中，置于37 ℃ 振荡培养箱中振荡培养18 小时。 以3000r/min离心 5 分钟 ，弃上 清 ，
经皮气管穿刺法建立家兔白色念珠菌肺炎动物模型
