河南省基层水产技术推广 补助项目技术指导员培训班
实 验 讲 义
河南师范大学水产学院
2013年12月
鱼病的检查与诊断
一、实验目的：
1、掌握水产养殖鱼类的外观形态及内部构造, 掌握鱼类主要疾病的外观症状； 2、掌握疾病检查的基本方法和技术； 3、掌握鱼类寄生虫病病原体的检查方法；
4、通过对检查结果进行分析、比较，做出疾病诊断。
二、实验材料：
鲤鱼或鲫鱼、泥鳅。
三、实验器材：
显微镜、解剖盘、直尺、天平、镊子、解剖剪、载玻片、盖玻片、滴瓶、培养皿、纱布、擦镜纸、吸水纸、蒸馏水、鱼用生理盐水。
四、实验方法与步骤
（一）、鱼病的检查方法 1、肉眼检查法（目检）：
病鱼在特定部位呈现出一定的病理变化，有时症状很清楚，用肉眼就可诊断，如水霉以及一些大型的寄生虫病原（蠕虫、甲壳动物）等。肉眼检查法比较方便，但也有一定的局限性，很多病原在感染鱼体后并不表现出明显病状，或某些症状隐藏在寄主的器官组织内，肉眼难于鉴别。因此，除用肉眼检查外，还应进行镜检，以保证检查结果的完整、可靠和正确性。
2、光学显微镜检查法（镜检）： （1）装片的制作
镜检是用光学显微镜或解剖镜检查病变标本或病原体的方法，镜检之前需要将待检组织样品制作成临时装片，然后才能进行观察。制作方法主要有以下两种：
? 玻片压展法：适用于解剖镜或低倍显微镜检查。用两片载玻片，先将需要检查的器官或组织的一部分或从体表刮下的粘液、肠官里取出的内含物等，放在其中的一片玻片上，滴加适量的蒸馏水或生理盐水（体外器官或黏液用蒸馏水，体内器官或内含物用生理盐水），用另一片玻片将它压成透明的薄层，即可放在低倍显微镜下检查，如发现病原体
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或某些可疑的病状，仔细用镊子或解剖针，将其从薄层中取出来，放在盛有蒸馏水或生理盐水的培养皿里，待以后进一步观察和处理。
? 载玻片压展法：适用于低倍或高倍显微镜检查。用小剪刀或镊子取出一小块组织或一小滴内含物置于载玻片上，滴加一滴生理盐水，盖上盖玻片，轻轻地压平后，先在低倍显微镜下检查，发现寄生虫或可疑现象，再用高倍显微镜仔细检查。
（2）显微镜使用操作步骤
a、实验时要把显微镜放在座前桌面上稍偏左的位置，镜座应距桌沿 6～7 cm左右； b、打开显微镜的电源开关，调节光强到合适大小；
c、转动物镜转换器，使低倍镜头正对载物台上的通光孔。先把镜头调节至距载物台1～2cm左右处，然后用左眼注视目镜内，接着调节聚光器的高度，使光线通过聚光器入射到镜筒内，这时视野内呈明亮的状态；
d、将所要观察的装片放在载物台上，使玻片中被观察的部分位于通光孔的正中央，然后用标本夹夹好载玻片；
e、先用低倍镜观察（物镜4 ╳、目镜10 ╳）。观察之前，先转动粗动调焦手轮，使载物台上升，物镜逐渐接近玻片。需要注意，不能使物镜触及玻片，以防镜头将玻片压碎。然后，左眼注视目镜内，同时右眼不要闭合，并转动粗动调焦手轮，使载物台慢慢下降，不久即可看到玻片中材料的放大物像；
f、如果在视野内看到的物像不符合实验要求（物像偏离视野），可慢慢调节载物台移动手柄。调节时应注意玻片移动的方向与视野中看到的物像移动的方向正好相反。如果物像不甚清晰，可以调节微动调焦手轮，直至物像清晰为止；
g、如果进一步使用高倍物镜观察，应在转换高倍物镜之前，把物像中需要放大观察的部分移至视野中央（将低倍物镜转换成高倍物镜观察时，视野中的物像范围缩小）。换高倍物镜后，视野中的物像不一定很清晰，可以转动微动调焦手轮进行调节。
h、在转换高倍物镜并且看清物像之后，可以根据需要调节孔径光阑的大小或聚光器的高低，使光线符合要求（一般将低倍物镜换成高倍物镜观察时，视野要稍变暗一些，所以需要调节光线强弱）。
i、观察完毕应先将物镜镜头从通光孔处移开，再将载物台缓缓落下，关闭显微镜电源。并检查零件有无损伤，特别要注意检查物镜是否沾水沾油，如沾了水或油要用镜头纸擦净，检查处理完毕后即可铺上防尘布。
（二）、鱼病的检查步骤：
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先目检后镜检，先体外后体内。
检查病鱼需按一定顺序进行，其顺序是先体外，后体内。各器官也应按一定顺序进行，通常是：体表粘液、鳍条、鼻腔、血液、鳃、口腔、脂肪组织、消化管（包括胃、肠和盲囊）、肝、脾、胆囊、心脏、肾、膀胱、性腺、眼、脑、脊髓、肌肉。因常见的主要鱼病大都发生在体表、鳃、肠道三个部位，故一般在实际诊断上，常只着重检查这三个部位。 1、体表：
目检：将鱼放在解剖盘里，首先观察其体色、体形肥瘦等有关情况，并注意观察皮肤是否擦伤或腐烂；是否长有水霉；有无发炎、充血或出血（细菌性鱼病有其本身的特征：赤皮病，烂鳃病，打印病等）；鳍条是否蛀烂；有没有白色小点状的小瓜虫囊泡或白色的粘孢子虫孢囊等，是否存在一些大型病原体（水霉，线虫，锚头蚤，鲺，钩介幼虫等）等。
用肉眼看不出来的病原体，则根据表现的症状来辨别：车轮虫，斜管虫，三代虫等引起的症状，一般会引起鱼体分泌大量粘液，鳍条末端腐烂，但是鳍条基部一般无充血现象。复口吸虫病后期，鱼的眼球出现浑浊，有白内障。
镜检：用解剖剪或镊子刮取鳍条和体表粘液，或用剪刀剪下少量鳍条，置于载玻片上，加上一滴蒸馏水，加盖盖玻片，即可进行镜检。该部位镜检常可发现车轮虫、斜管虫、鱼波豆虫、杯体虫和小瓜虫。
2、鳃：
目检：观察鳃的外观形态和颜色，观察鳃丝色泽，粘液的多少，有无充血、发白或肿胀；鳃丝末端是否有无污泥和腐烂现象；有无肉眼可见的白色胞囊及大型的寄生虫等。
细菌性烂鳃病的鳃片颜色比正常鱼的颜色较白，略带有红色小点或者小块，常常附有污泥。严重者鳃丝末端腐烂，并有大量粘液。中华蚤，指环虫以及粘孢子虫病等寄生虫，常表现为鳃部粘液较多，鳃肿大，鳃上有白色虫体或者胞囊。
镜检：用小剪刀取一小片鳃组织放在载玻片上，加少量清水，盖上盖玻片，置显微镜下检查。或用镊子把每片鳃片上的粘液完全刮下，加少量水稀释后检查。检查完小型寄生虫后，将左右两鳃完整取出，一片一片地分开放置在培养皿里，加入清水，放在低倍显微镜或解剖镜下观察，观察时用两根解剖针把鳃丝逐条拨开，仔细检查。
鳃是特别容易被病原体寄生的器官。水霉、各类原生动物、单殖吸虫类、复殖吸虫类的囊蚴、软体动物幼虫、甲壳类等均易寄生在鳃上。检查时，每侧鱼鳃至少要检查两片。
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取鳃丝检查时，最好从每侧鳃的第一鳃片接近两端的位置剪取一小块，因为这个地方寄生虫较为集中。
3、肠道：
（1）内脏剖检：对鱼体内脏进行检查首先需要解剖病鱼。
将待检鱼置解剖盘，使其腹部向上，用剪刀在肛门前与体轴垂直方向剪一小口，将剪刀尖插入切口，沿腹中线向前经腹鳍中间剪至下颌；
使鱼侧卧，左侧向上，自肛门向背方剪到脊柱，沿测线下方向前剪至鳃盖后缘，再沿鳃盖后缘剪至下颌，除去左侧体壁肌肉，使心脏和内脏暴露（剪开体壁时剪刀尖不要插入太深，而应向上翘，以免损伤内脏）。
解剖鱼体一侧的体壁后，内部器官便显露出来，首先要仔细观察显露出来的器官，各器官是否正常，有无出血、变色、硬化、肥大或萎缩的现象，是否有腹水或有否大型寄生虫。如果发现有白点，可能是粘孢子虫或其他寄生虫。
目检完毕，把腹腔液用吸管吸出镜检。接着把整个内脏放在解剖盘上，将逐个器官分开，依次进行检查。实质器官如肝、肾等组织器官切下一小块，放在干净的两块载玻片之间挤压，用玻片压展法进行镜检，对检出病原的组织进行固定和保存标本。 （2）肠道检查：先把肠外壁脂肪组织除干净，然后将肠管拉直。
目检，查看肠道是否红肿，肠外壁是否有寄生虫的胞囊，肠外壁若出现许多小白点，通常是粘孢子虫的胞囊。
用剪刀小心地把整条肠道剪开，剪的时候将剪刀尖上翘插入肠腔，由后向前剪开肠壁
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图1、鱼体剖检图
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