AdMax系统构建腺病毒载体介导SCL基因转染Cajal样间质细胞及其表达

AdMax系统构建腺病毒载体介导SCL基因转染Cajal样

间质细胞及其表达

作者：周建民;王勤章;丁国富;屠松;牛世杰;杨发英

作者机构：甘肃省张掖市人民医院泌尿外科,张掖,734000;石河子大学医学院附属第一医院泌尿外科,石河子,832000;石河子大学医学院附属第一医院泌尿外科,石河子,832000;甘肃省张掖市人民医院泌尿外科,张掖,734000;甘肃省张掖市人民医院泌尿外科,张掖,734000;甘肃省张掖市人民医院泌尿外科,张掖,734000 来源：临床与实验病理学杂志 ISSN：1001-7399 年：2012 卷：028 期：001 页码：33-37 页数：5 中图分类：R33 正文语种：chi

关键词：干细胞白血病基因;腺病毒载体;转染;Cajal样间质细胞

摘要：目的 构建含有人干细胞白血病(stem cell leukemia,SCL)基因的重组腺病毒载体,并观察其对豚鼠膀胱Cajal样间质细胞的转染及其介导SCL基因的表达.方法 采用PCR方法从含人SCL基因质粒中扩增SCL基因,连接到腺病毒穿梭质粒的多克隆位点上,构建重组穿梭质粒pDC315-EGFP/SCL,在脂质体介导下与腺病毒辅助大质粒pBHGlox(delta)E1,3Cre共转染293细胞,包装产生复制缺陷型重组腺病毒pDC315-SCL经HEK293细胞扩增,纯化后测定病毒滴度.通过观察绿色荧光蛋白的表达评估重组腺病毒对Cajal样间质细胞的转染率,RT-PCR法分析转染Cajal样间质细胞后SCL mRNA的表达.结果 PCR结果和Western blot法检测证实pDC315-SCL重组腺病毒载体构建成功,滴度达到

1×1010 PFU/ml,对膀胱Cajal样间质细胞的转染率高达98%,RT-PCR法检测转染Cajal样间质细胞后SCL mRNA有表达.结论 成功构建pDC315-SCL重组腺病毒载体对Cajal样间质细胞有很强的转染能力,可介导SCL基因在Cajal样间质细胞的表达.