不同pH条件下五倍子中EGCG，EGC，ECG含量测
定及分析
五倍子是瘿绵蚜科（Pemphigidae）五节根蚜亚科（Fordinae）某些蚜虫寄虫瘿。五倍子别名文蛤，百虫仓，木附子等，是生在漆树科（Anacadiaceae）盐肤木属（Rhus L）几种树的复叶上形成的一类商品，五倍子有角倍类，肚倍类，花倍类。始载于《开宝本草》，具有敛肺降火，涩肠止泻，固精缩尿，止汗，止血，解毒，敛疮等多种临床功效，以它为原料的各种产品广泛应用于医药，冶金，食品航天等领域[1-3]。
五倍子主要有效成分为鞣质，又称鞣酸。因五倍子盛产于我国，国际上又将五倍子鞣质称为中国鞣质，它是倍酰葡萄糖的混合物，即葡萄糖上的羟基与没食子酸所形成的酯类化台物的混合物，属可水解鞣质。五倍子的鞣质含量很高，最高可达70%以上。1994年林余霖等测定了7种五倍子中单宁酸的含量，角倍为4901%，肚倍为6475%圆角倍为6075%，其他几种均在40%左右。没食子酸也是五倍子中主要成分之一，在制药等工业上应用广泛，也是药物中间体，它的含量约占五倍子2%一4%。由于含量小，工业上从五倍子获取的没食子酸主要通过五倍子鞣质的水解获得，它是我国的出口产品之一。五倍子中还含有五倍子油。五倍子油的主要化学成分为癸酸、月桂酸、内豆蔻酸、棕榈酸、硬腰酸、油酸、亚油酸、亚麻酸等8种；五倍子中含有多种微量元素，包括铜、锌、铁、镁、钠、钙等的化合物；此外，五倍子中还有树脂、脂肪物质、淀粉、蜡质、蛋白质等其他成分。 五倍子中化学成分现已成为研究热点，李春远等对五倍子的石油醚和氯仿提取物做了分离，一共获得10个化合物，分别为2-羟基-6-十五烷基苯甲酸、白果酚、棕榈酸-1，3-二甘油酯、β-谷甾醇、正二十五烷、3-甲氧基-4-羟基-苯甲酸、棕榈酸、月桂酸、肉豆蔻酸、
没食子酸。而五倍子中EGCG，EGC，ECG报道较少。EGCG（表没食子儿茶素没食子酸酯），是从茶叶中分离得到的儿茶素类单体，是茶多酚生物活性的主要成份。纯品为白色粉末，味苦涩、无毒、极易溶于水，能溶于甲醇、乙醇、乙腈和乙酸乙酯，不溶于氯仿。熔点218℃，在空气中易被氧化，变成微粉色，也容易随着温度的升高而被氧化。EGCG中含多个酚羟基，具有很强的抗氧化和清除自由基的能力。EGC（表没食子儿茶素），别名：表没食子酸儿茶素；绿茶儿茶酚；L-表没食子儿茶精等。熔点208-210℃。储存温度2-8℃。EGC中的多酚结构与其抗氧化或促氧化作有关[9-10]。ECG（表儿茶素没食子酸酯）。分子式：C22H18O10。分子量*****[11-12]。纯品为白色粉末。储存温度2-8℃。酯型儿茶素ECG具有极强的抑菌活性，可能开发成一种天然的类抗生素物质。本实验依据EGCG，EGC，ECG的理化性质，应用RP-HPLC测定在不同pH条件下五倍子中EGCG，EGC，ECG的含量变化。 结构式： 1实验材料与仪器
11实验药品五倍子（角倍，购自昆明道地中药饮片厂 规格：饮片 批号：*****）；EGCG（道斯夫生物479-560-7）；ECG（中国药品生物制品检定所 1257-08-05）；EGC（上海锐谷生物科技有限公司970-74-1）。
12仪器与试剂高效液相色谱仪（Agilent1200 型 VWD检测器）；Agilent C18ZORBAX SB-C18柱（46×250 mm，5 μm）。万分之一分析天平（北京赛多利斯仪器系统有限公司）；电子天平（奥豪斯仪器上海有限公司制造）；精密pH测定仪（上海雷磁 PHS-3C型）；循环水真空泵（巩义市英峪予华仪器厂 SHZ-DIII型）；高速多功能粉碎机（YB-500A型）；80目筛（5号筛180μm）；电热恒温干燥箱（DHG-9071A型）；超声仪（KUDOS型）；移液管；烧杯；玻璃棒；容量瓶；微孔滤膜（045μm）；注射器（1mL）；无水甲醇（色谱纯）；无水乙醇（分析纯）；磷酸（分析纯）；磷酸氢二钠（分析纯）；冰醋酸（分析
纯）；纯化水。 2实验方法
21磷酸盐缓冲液的配制A液：取磷酸10 mL，加纯化水至100 mL，摇匀。B液：称取磷酸氢二钠7163 g，加纯化水使溶解成100 mL。分别取上述不同体积的A 液和B液混合配制成不同pH（2、3、4、5、6、7、8）的磷酸盐缓冲溶液，即得。
22对照品溶液的制备取EGCG标准品适量，于分析天平上精密称定，称得29 mg；取ECG标准品适量，于分析天平上精密称定，称得3 mg；取EGC标准品适量，于分析天平上精密称定，称得27 mg。分别置于10 mL容量瓶中，加纯净水定容至10 mL。在超声仪中超声溶解，通过045 μm滤膜注射至进样瓶并编号，即得。
23供试品溶液的制备取五倍子样品适量，敲开囊体，去除蚜虫尸体和蚜虫排泄物，用粉碎机粉碎，过80目筛，于电子天平上分别称取10 g五倍子粉末7份，置于试管中并编号（2，3，4，5，6，7，8），分别加入磷酸盐缓冲液（编号与pH值对应）20 mL，在超声仪中超声1h，用045 μm微孔滤膜抽滤，用1 mL注射器吸取适量对照品溶液，通过滤膜注射至进样瓶并编号，即得。
24色谱条件色谱条件为：Agilent C18色谱柱C18ZORBAX SB-C18柱（46×250 mm，5 μm）；流动相为甲醇：水：冰醋酸（25：74：1）混合液；温度25℃；流速：1 mL/min；波长270nm；进样量：10 uL；时间：30 min。 25标准曲线的绘制
251EGCG标准曲线的绘制取EGCG适量于分析天平上精密称定360 mg，加色谱甲醇溶解配制成定容至10mL，用1 mL注射器吸取适量，通过045 μm微孔滤膜注入进样瓶，按上述EGCG色谱条件分别进样2、4、6、8、10、12 μL，以EGCG的峰面积（Y）对标准品质量（X）进行线性回归，得方程Y=1387X+5172，r=1，结果表明：EGCG峰面积值与浓度有良好的线性关系，线性范围为：072μg-432 μg。 252EGC标准曲线的绘制取EGC适量于分析天平上精密称定300
不同pH条件下五倍子中EGCG,EGC,ECG含量测定及分析
