C．步骤③沿多个方向划线，使接种物逐渐稀释，培养后可根据出现的单个菌落计数 D．步骤④是将培养皿放在恒温培养箱中培养，一段时间后所得到的都是X细菌的菌落 答案：B
3．(2016·浙江10月选考)请回答从土壤中分离产脲酶细菌和脲酶固定化实验的有关问题：
(1)LB固体培养基：取适量的蛋白胨、酵母提取物、NaCl，加入一定量的蒸馏水溶解，再加________，灭菌备用。
(2)尿素固体培养基：先将适宜浓度的尿素溶液用________灭菌过的G6玻璃砂漏斗过滤，因为G6玻璃砂漏斗________________________，故用于过滤除菌。然后将尿素溶液加入已经灭菌的含有酚红的培养基中，备用。
(3)取适量含产脲酶细菌的104、10
－
－5
两种土壤稀释液，分别涂布接种到LB固体培养
基和尿素固体培养基上，培养48 h，推测固体培养基上生长的菌落数最少的是______(A.10
－5
稀释液＋尿素固体培养基 B．10
－5
稀释液＋LB固体培养基 C．10
－4
稀释液＋尿素固体
培养基
D．10
－4
稀释液＋LB固体培养基)。在尿素固体培养基上产脲酶细菌菌落周围出现
________，其原因是细菌产生的脲酶催化尿素分解产生________所致。
(4)制备固定化脲酶时，用石英砂吸附脲酶、装柱。再用蒸馏水洗涤固定化酶柱，其作用是________。
答案：(1)琼脂糖
(2)高压蒸汽 孔径小，细菌不能滤过 (3)A 红色环 氨(或NH3) (4)除去游离的脲酶
4．请结合图示，回答下列有关大肠杆菌分离与纯化的问题：
(1)稀释
用1 mL无菌吸管吸取1 mL大肠杆菌培养液，加入盛有9 mL________的大试管中，充分混匀，稀释________倍；按照同样的方法依次进行稀释制成101、102、103、104、10
－5
－
－
－
－
、10
－6
系列稀释度的大肠杆菌稀释液。
(2)划线或涂布 ①划线分离法
a．操作：在________旁，左手拿皿底，右手拿接种环，挑取大肠杆菌培养液在平板上划线。
b．划线方法：________划线和________划线。
c．平行划线时，第一次划线及每次划线之间都要灼烧接种环，划线结束后也要灼烧接种环，目的分别是什么？
②涂布分离法
a．操作：取0.1 mL稀释度不同的菌液，加在培养皿的固体培养基上，用玻璃刮刀涂布在培养基平面上，然后进行培养。
b．图示：
(3)培养：将接种的平板________于培养箱或温室中37 ℃培养12～24 h。 答案：(1)无菌水 10
(2)a.酒精灯火焰 b．平行 连续 c. 第一次灼烧 每次划线之前灼烧 杀死上次划线后接种环上杀死接种环上原有的微生物 残留的菌种，使下次划线的菌种直接来源于上次划线的末端，使每次划线后菌种数目减少 (3)倒置 杀死接种环上残存的菌种，避免细菌污染环境和感染操作者 划线结束时灼烧 目的
1．(2024·杭州模拟)如表为某微生物培养基的配方，请回答下列问题：
成分 NaNO3 K2HPO4 琼脂 MgSO4·7H2O 含量 3 g 1 g 15 g 0.5 g 成分 FeSO4 C6H12O6 H2O 青霉素 含量 0.01 g 30 g 1 000 mL 0.1万单位 (1)依物理性质，该培养基属于__________培养基。依用途划分，则属于__________培养基。
(2)根据培养基原料，所培养微生物的同化作用类型是________________。
(3)该培养基中的碳源是__________。不论何种培养基，在各成分都融化后分装前，要进行的是__________。
(4)若用该培养基培养纤维素分解菌，应除去的物质是________________，应加入的物质是__________。
(5)细菌种群进化过程中，起主要作用的变异是______。(填编号) A．环境条件 C．基因突变
B．基因重组 D．染色体畸变
解析：(1)该培养基中含有凝固剂琼脂，属于固体培养基。该培养基含有抗生素(青霉素)，属于选择培养基。(2)该培养基含有有机碳源——C6H12O6，可见所培养的微生物是异养型生物。(3)不论何种培养基，在各成分都融化后分装前，要先进行pH调整。(4)若用该培养基培养纤维素分解菌，应除去青霉素和C6H12O6，加入纤维素粉。(5)细菌是原核生物，没有染色体，不会发生染色体畸变；细菌不能进行有性生殖，不会发生基因重组，所以细菌可遗传的变异只有基因突变。
答案：(1)固体 选择 (2)异养型 (3)C6H12O6
调整pH (4)青霉素和C6H12O6 纤维素粉 (5)C 2．请回答下列有关微生物培养基的问题：
(1)微生物的培养都需要培养基，一般培养基都含有的成分有______________________；配制固体培养基还需要加入凝固剂________________。
(2)制备牛肉膏蛋白胨固体培养基的一般流程包括：
计算→称量→融化→A→B
上述流程中A代表__________，实验室中这个步骤常用的方法有__________________；流程中B代表________________，该步骤进行的适宜温度是__________°C左右。
(3)鉴定分解尿素的细菌的方法是向以______________为唯一氮源的培养基中加入__________指示剂，培养某种细菌，如果pH升高，指示剂将变红，说明该种细菌能分解尿素。
(4)与全营养培养基中的菌落相比，选择培养基中菌落数( ) A．多 C．相等
B．少 D．几乎为零
解析：(1)一般培养基中都应含有水、无机盐、碳源和氮源四种成分。(2)制备牛肉膏蛋白胨固体培养基的流程包括：计算→称量→融化→灭菌→倒平板；灼烧灭菌、干热灭菌和高压蒸汽灭菌是实验室中常用的灭菌方法。(4)选择培养基上只能生长特定的微生物，因此该培养基上长出的菌落数目比全营养培养基上长出的菌落数少。
答案：(1)水、碳源、氮源和无机盐 琼脂
(2)灭菌 灼烧灭菌、干热灭菌和高压蒸汽灭菌 倒平板 60 (3)尿素 酚红 (4)B 3．(2024·浙江五校高三联考)某村庄有一条小溪，近几年由于上游几家乳胶厂不断向其中排放废水，小溪变得不再清澈。某同学想测定该溪水中的细菌含量情况。回答下列问题：
(1)先根据所学知识制备LB培养基。制备该培养基的步骤是：计算→称量→融化→灭菌→倒平板。下列关于制备LB培养基的叙述，错误的是________。
A．培养基应先调pH再进行灭菌 B．培养基应先灭菌再分装到培养皿中 C．融化琼脂时不能使培养基溢出或烧焦
D．灭菌时一般用高压蒸汽灭菌锅在121 ℃，500 g/cm2 压力下灭菌15分钟
(2)该同学利用上述制备的培养基来检测水样中的细菌数量，他所选择的分离方法应是____________；该同学在接种前，随机取若干灭菌后的空白平板先行培养了一段时间，这样做的目的是____________________________。接种在超净工作台上进行，实验前一段时间需打开工作台上的紫外灯和过滤风，实验中需关闭的是____________(A.酒精灯 B．照明灯 C．紫外灯 D．过滤风)。
(3)值得注意的是，他所选择的这种方法统计的结果往往比实际细菌的数目要低，这是
2024版浙江新高考选考生物一轮复习教师用书：第31讲 微生物的利用
