第31讲 微生物的利用
知识内容 1．大肠杆菌的培养和分离 考试要求 实验与探究能力 知识内容 2.分离以尿素为氮源的微生物 考试要求 实验与探究能力 细菌的培养与分离
1．微生物：结构简单、形体微小的单细胞、多细胞或没有细胞结构的低等生物，如酵母、细菌、蓝细菌和病毒等。绝大多数微生物与传染病无关，90%以上的微生物对人类有利。
2．培养基 含义 微生物生存的环境和营养物质 ①水、无机盐、碳源和氮源，还需满足不同微生物生长对pH、特殊营养物质以成分 及氧气的要求 ②LB培养基：蛋白胨、酵母提取物、氯化钠、水、琼脂(固体培养基) LB 培养 基的 作用 ①蛋白胨、酵母提取物：为细菌生长提供碳源和氮源； ②氯化钠：维持一定的渗透压； ③琼脂：凝固剂，不易分解，一般不作为营养物质。其在96 ℃时融化成液体，冷却到45 ℃以下即重新凝固 ①按物理状态分，包括固体培养基、半固体培养基、液体培养基； 种类 ②按特殊用途分，包括基础培养基、加富培养基、选择培养基和鉴别培养基； ③按培养不同微生物分，包括细菌培养基(pH呈中性偏碱，添加有机物如蛋白胨、酵母提取物)、霉菌培养基(pH呈中性偏酸，添加无机物或者添加蔗糖的豆芽汁) 3.细菌的培养和分离 细菌培养 细菌以分裂的方式繁殖，分裂速度很快。在培养细菌时，一般用接种环将已有细菌的培细菌分离 划线分离法 用接种环在固体培养基涂布分离法 先将培养的菌液稀释，通常稀释105～107倍。取0.1 mL稀释度不同的菌液，加在培养皿的固体培养基上，用玻璃刮刀涂布在培养基平面上，然后进养物转移到新的培养基中。在液体培养基中，表面连续划培养8 h，每毫升培养基中有几亿个细菌。接种于固体培养基10～20 h后，一个细菌细胞线的操作。由于划线过程会繁殖成许多个细菌细胞，聚集在一起，形成菌落 中，接种环上的菌液逐渐减少，因此划线最后部分的细菌间距离加大。培养一段时间后，每一个细菌细胞产生一个菌落。再将每个菌落分别接种到试管斜面上，从而除去杂菌 方法简单 行培养，得到相互分开的菌落。通常以每个培养皿有20个以内的单菌落最为合适 单菌落更易分开，但操作复杂些 单菌落的分离是消除污染杂菌的通用方法，也是用于筛选高表达量菌株的最简便方法之一 4.灭菌操作 项目 适用 材料 或用具 续 表 项目 灼烧灭菌 高压蒸汽灭菌 LB培养基：121℃(1 kg/cm2压力)、15 min 灭菌 条件 及时间 在酒精灯火焰上充分灼烧，直至烧红，冷却后备用 含葡萄糖的培养基：90℃以上(500__g/cm2压力)、30 min 玻璃器皿：高压蒸汽灭菌后放入60～G6玻璃砂漏斗 过滤 过滤灭菌 灼烧灭菌 接种环、接种针或其他金属用具 高压蒸汽灭菌 培养基、培养皿、试管等玻璃器具等 过滤灭菌 尿素等加热会分解的物质
2024版浙江新高考选考生物一轮复习教师用书：第31讲 微生物的利用
